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抗原诱导法建立小鼠实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）模型
摘要
实验性自身免疫性重症肌无力（Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis, EAMG）是研究人类自身免疫性重症肌无力（Myasthenia Gravis, MG）病理机制和治疗策略的核心动物模型。本文详述通过抗原免疫法诱导小鼠EAMG的标准流程，包括抗原选择、免疫方案、疾病评价指标及注意事项，为神经免疫学研究提供方法学参考。
一、背景简介
重症肌无力（MG）是一种由自身抗体介导、靶向神经肌肉接头（NMJ）突触后膜的乙酰胆碱受体（AChR）或其他相关蛋白（如MuSK、LRP4）的慢性自身免疫病。EAMG通过主动免疫动物模拟MG的核心病理特征，包括肌无力症状、AChR抗体产生及NMJ结构破坏，是研究疾病发病机制和药物干预的重要工具。
二、抗原选择与制备原理
1. 核心抗原
- 重组人乙酰胆碱受体α亚基片段（rAChR α1-210）：含主要免疫原性区域（MIR），可高效诱导特异性抗体。
- 合成肽段（R97–116肽）：来源于AChR α亚基胞外段（大鼠序列：HWMKDYGYIKSVVTNPDLGQ），具有强免疫原性。
- 天然电鳐AChR（nAChR）：需从电鳐电器官提取，成本较高但模拟效果更佳。
2. 佐剂系统
- 完全弗氏佐剂（CFA）：含灭活分枝杆菌，初次免疫时使用。
- 不完全弗氏佐剂（IFA）：加强免疫时使用。
- 佐剂作用：增强抗原免疫原性，促进Th1/Th17型免疫应答。
3. 抗原乳化
- 将抗原（如20 μg R97–116肽）与佐剂按1:1体积比混合。
- 使用双筒注射器反复推拉或超声乳化至形成稳定“油包水”乳液（滴入水不扩散）。
三、动物与免疫方案
1. 动物品系
- 推荐品系：C57BL/6小鼠（雌性，8~10周龄，对R97–116肽敏感）。
- 饲养条件：SPF级环境，自由摄食饮水，实验前适应1周。
2. 免疫流程
| 阶段 | 操作 |
|---|---|
| 初次免疫 | 皮下多点注射：背部4点（共100 μL乳化抗原） |
| 加强免疫 | 第30天同法注射相同剂量抗原（改用IFA佐剂） |
| 对照组 | 注射等量PBS+佐剂混合乳液 |
四、疾病评价标准
1. 临床评分（每周2次盲法评估）
| 分值 | 临床症状 |
|---|---|
| 0 | 活动正常，无肌无力 |
| 1 | 轻度活动减少，抓握力减弱 |
| 2 | 步态不稳，头部下垂，无震颤 |
| 3 | 严重虚弱，震颤，弓背 |
| 4 | 濒死状态或死亡 |
2. 电生理检测（终末期）
- 重复神经电刺激（RNS）：刺激坐骨神经，记录腓肠肌复合肌肉动作电位（CMAP）。
- 阳性判定：第4波CMAP振幅衰减率 > 10%（提示NMJ传递障碍）。
3. 血清学分析
- ELISA法：检测血清抗AChR抗体效价（使用重组人AChR或R97–116肽包被板）。
- 高抗体水平通常与临床严重度正相关。
4. 组织病理学
- 免疫荧光染色：腓肠肌冰冻切片，使用α-银环蛇毒素标记AChR簇，观察NMJ形态破坏。
- 补体沉积检测：C3或MAC抗体染色证实补体介导损伤。
五、关键注意事项
-
抗原稳定性
合成肽段需分装冻存于－80℃，避免反复冻融。 -
乳化质量
乳化不完全将显著降低免疫成功率，应以乳滴在水面不分散为达标。 -
动物个体差异
C57BL/6小鼠发病率约60%~80%，需足够样本量（建议每组≥10只）。 -
伦理规范
体重下降＞20%或评分≥3分的小鼠应立即实施人道终点。
六、模型应用价值
- 机制研究
解析T/B细胞应答、抗体亚型转换、补体激活在NMJ损伤中的作用。 - 药物筛选
评估新型免疫抑制剂（如靶向B细胞/补体药物）、抗体清除疗法效果。 - 疫苗开发
测试抗原特异性免疫耐受策略。
结论
抗原诱导的小鼠EAMG模型通过模拟MG的核心免疫病理特征，为疾病研究和治疗开发提供了高度可操作的平台。严格的抗原制备、标准化免疫方案及多维度评价体系是保证模型可靠性和可重复性的关键。
参考文献（示例，非企业相关）
- Christadoss P. et al. Immunol Res (2011)
- Luo J. et al. J Neuroimmunol (2020)
- Lindstrom JM. J Immunol Res (2018)
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