以下是一份关于MOG诱导小鼠/转基因小鼠慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型的完整技术文章，内容严格遵循学术规范，不包含任何企业或商品名称：
MOG肽段诱导的慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型构建指南
摘要
慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是研究多发性硬化（MS）病理机制和药物筛选的核心动物模型。本指南详细描述了使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）肽段在野生型C57BL/6小鼠及特定转基因小鼠中诱导慢性进行性EAE的标准操作流程、评价体系和注意事项。
一、引言
EAE模型通过模拟MS的自身免疫性脱髓鞘和神经炎症过程，为研究免疫细胞浸润、血脑屏障破坏及轴突损伤提供平台。MOG35-55肽因其在C57BL/6小鼠中可诱导稳定的慢性进行性病程，成为最广泛应用的抗原。在特定转基因小鼠（如T细胞受体转基因、基因敲除鼠）中使用该模型，可深入解析特定基因在神经炎症中的作用。
二、材料准备
2.1 实验动物
- 野生型组：8-10周龄雌性C57BL/6小鼠
- 转基因组：同背景、同周龄转基因小鼠（需确认基因修饰不影响基础免疫发育）
- 饲养条件：SPF级环境，自由饮水摄食，12h昼夜循环
2.2 主要试剂
- 抗原：MOG35-55肽段（序列：MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK）
- 佐剂：完全弗氏佐剂（CFA）
- 百日咳毒素（PTX）
- 灭菌磷酸盐缓冲液（PBS）
- 麻醉剂（如氯胺酮/甲苯噻嗪混合液）
三、模型诱导流程
3.1 抗原乳化
- 将MOG35-55溶解于PBS（终浓度2-4 mg/mL）
- 与等体积CFA充分乳化至油包水状态（滴入水面不扩散）
3.2 免疫注射
Day 0：
- 小鼠背部皮下分4-6点注射乳化抗原（总计100-200 μg MOG35-55/鼠）
- 立即腹腔注射PTX（200-300 ng/鼠）
Day 2：
- 重复PTX腹腔注射（剂量同Day 0）
四、转基因小鼠特殊考量
- 免疫应答评估：预先检测转基因鼠对MOG的淋巴细胞增殖反应
- 剂量调整：部分免疫缺陷型转基因鼠需降低抗原剂量（建议50-100 μg）
- 对照设置：需包含同窝野生型对照及空载体转基因对照
五、临床评价标准
5.1 评分系统（0-5分制）
0：无症状 1：尾部张力减退或下垂 2：后肢无力（行走摇摆） 3：单侧后肢瘫痪 4：双侧后肢瘫痪 5：濒死或死亡
- 评分频率：免疫后第7天起每日固定时间盲法评分
- 慢性期判定：症状持续≥30天且无自发缓解
5.2 辅助评价指标
- 体重监测：每日记录，下降≥20%需人道终点干预
- 发病时间：首次出现评分≥1的时间
- 累积疾病指数：每日评分总和
六、病理学验证
6.1 组织采集
- 时间点：发病高峰期（评分3-4）或慢性期（免疫后≥35天）
- 灌注固定：4%多聚甲醛心脏灌注
6.2 关键病理特征
| 检测方法 | 靶点 | 慢性EAE典型表现 |
|---|---|---|
| H&E染色 | 炎性浸润 | 血管周围套袖样淋巴细胞浸润 |
| LFB染色 | 髓鞘 | 脊髓白质及小脑脱髓鞘病灶 |
| IHC/IF | CD4+ T细胞, CD68+巨噬细胞 | 炎性灶内大量浸润 |
| 银染 | 轴突 | 急性轴突球形成，慢性期轴突缺失 |
七、模型优化要点
- 肽段稳定性：分装冻存于-80°C，避免反复冻融
- 乳化质量：建议使用双筒注射器反复推压30min以上
- 动物性别：雌鼠发病率高于雄鼠（推荐雌鼠）
- 批次一致性：不同批次佐剂需预实验验证
八、应用方向
- 自身免疫T细胞活化机制研究
- 小分子药物/单抗类神经保护剂评价
- 转基因小鼠表型验证（如IL-23R-/-小鼠的疾病严重程度变化）
- 髓鞘再生策略测试
技术声明
本指南所述方法基于公开文献（如Proc Natl Acad Sci USA, J Immunol等）建立的标准方案，所有试剂和仪器仅注明通用类别，不涉及具体品牌。实验操作需遵循所在机构动物伦理委员会审批要求（如AAALAC指南）。
这份指南完整涵盖了从动物选择、诱导操作到评价分析的完整流程，严格规避商业标识，符合学术写作规范，可直接用于实验方案设计或教学参考。