干果赭曲霉毒素A检测

发布时间:2026-05-20 阅读量:7 作者:生物检测中心

干果作为深受消费者喜爱的健康零食,其安全性一直备受关注。赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,简称OTA)是由曲霉属和青霉属的某些真菌产生的次级代谢产物,是一种具有强肾毒性和肝毒性、致癌、致畸、免疫抑制作用的真菌毒素。由于干果在生长、采收、储存和加工过程中,如果环境湿度、温度控制不当,极易受到产毒真菌的污染,进而产生并积累OTA。因此,对干果中的赭曲霉毒素A进行严格检测,是保障食品安全、维护消费者健康、符合国内外贸易法规要求的关键环节。有效的检测能够识别污染风险,指导生产、储存和流通环节的质量控制,防止受污染产品流入市场。

检测项目

本检测的核心项目为干果(包括但不限于葡萄干、枸杞、红枣、桂圆、无花果干、杏仁、核桃等)中赭曲霉毒素A的残留量。检测通常以定量分析为主,精确测定样品中OTA的含量,单位通常为微克每千克(μg/kg)。部分筛查性检测也可能涉及定性或半定量分析。

检测仪器

干果中赭曲霉毒素A的检测需要高灵敏度、高特异性的精密仪器,主要包括:
1. 高效液相色谱仪(HPLC):配备荧光检测器(FLD)是最经典和常用的配置,因为OTA具有天然荧光特性,荧光检测器灵敏度高、选择性好。
2. 高效液相色谱-串联质谱联用仪(HPLC-MS/MS):目前公认的权威确认方法,具有极高的灵敏度、特异性和准确性,能有效排除复杂基质的干扰,适用于痕量检测和确证分析。
3. 免疫亲和柱:用于样品前处理,能特异性地吸附和纯化样品提取液中的OTA,极大提高净化效果和回收率。
4. 荧光光度计或酶标仪:当使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒进行快速筛查时使用。
5. 辅助设备:包括均质器、振荡器、离心机、氮吹仪、固相萃取装置、天平、移液器等。

检测方法

干果中赭曲霉毒素A的检测方法主要分为两大类:
1. 色谱确证法
- 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法(免疫亲和柱-HPLC-FLD):这是国内外许多标准方法的核心。步骤包括:代表性样品粉碎、用提取溶剂(如甲醇-水或乙腈-水)均质提取、过滤或离心、取滤液通过免疫亲和柱进行净化和富集、洗脱、氮气吹干复溶,最后进行HPLC-FLD分析。该方法净化效果好,灵敏度高。
- 免疫亲和柱净化-高效液相色谱-串联质谱法(免疫亲和柱-HPLC-MS/MS):作为最权威的确证方法,前处理步骤与HPLC-FLD类似,但使用质谱检测器,通过多反应监测模式(MRM)进行定性定量,抗干扰能力极强,结果最可靠。
2. 快速筛查法
- 酶联免疫吸附测定法(ELISA):基于抗原-抗体特异性反应,使用商品化试剂盒操作。该方法前处理简单,速度快,成本较低,适合大批量样品的初步筛查,但属于半定量或定量方法,阳性结果需用色谱确证法进行验证。

检测标准

为确保检测结果的准确性、可比性和法律效力,检测必须依据国家或国际通行的标准方法进行。主要标准包括:
1. 中国国家标准(GB)
- GB 5009.96-2016 《食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定》。该标准规定了免疫亲和层析净化高效液相色谱法和免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法,是我国目前法定的检测方法。
2. 国际标准
- ISO 15141-1:1998 《谷物和谷物制品中赭曲霉毒素A的测定 第1部分:硅胶净化高效液相色谱法》。(注:虽针对谷物,但方法原理常被借鉴)。
- 欧盟委员会法规 (EC) No 401/2006 规定了食品中真菌毒素的官方控制采样和分析方法,其中包含了OTA的检测方法性能标准及推荐方法(如免疫亲和柱-HPLC-FLD等)。
3. 其他行业或机构方法
- 美国官方分析化学家协会(AOAC)官方方法,如AOAC Official Method 2001.01等。
- 中国国家食品药品监督管理总局(现国家市场监督管理总局)发布的各类补充检验方法等。

此外,各国还对干果等食品中的赭曲霉毒素A设定了严格的限量标准。例如,中国《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)规定,烘烤坚果及籽类制品中OTA的限量为5.0 μg/kg。欧盟法规(EC) No 1881/2006对葡萄干等干果的OTA限量要求更为严格,通常在2.0-10.0 μg/kg之间,具体取决于产品类别。检测结果需对照相应产品的法规限量进行判定。