去势动物前列腺增生（大鼠/小鼠） - 中析研究所生物检测中心

去势动物前列腺增生研究：核心检测项目详解（大鼠/小鼠模型）

前言去势动物（手术或化学摘除睾丸）后给予外源性雄激素（如丙酸睾酮）可诱导良性前列腺增生（BPH）模型，是研究增生机制与药物干预的核心工具。以下系统阐述该模型的关键检测项目，覆盖形态、组织、细胞及分子层面。

前列腺湿重与指数
- 操作：动物处死后完整剥离前列腺（腹侧叶/背侧叶/侧叶/全前列腺），滤纸吸干称重。
- 计算：前列腺指数 = (前列腺湿重 mg / 动物体重 g) × 100%。
- 意义：评价增生程度最直观的宏观指标。

苏木精-伊红染色
- 目的：观察整体组织结构、腺腔形态、上皮细胞形态（增生/萎缩）、间质比例、炎症浸润。
- 关键观测：
  - 腺上皮高度（是否增高、多层化）
  - 腺腔直径（是否扩大或囊性变）
  - 腺体/间质比例（是否增大）
  - 乳头状内褶（是否增多）
  - 炎性细胞浸润程度与部位。
Masson三色染色
- 目的：特异性显示胶原纤维（蓝色）与平滑肌（红色）。
- 意义：定量评估间质纤维化程度和平滑肌增生比例，是增生重要病理特征。

细胞增殖核抗原检测
- 方法：免疫组织化学（IHC）检测 Ki-67 或 PCNA（增殖细胞核抗原）。
- 定位：主要在腺上皮基底细胞和腔细胞核。
- 量化：计算阳性细胞核数占总细胞核数的百分比（增殖指数）。
细胞凋亡检测
- 方法：
  - TUNEL法：标记DNA断裂片段。
  - IHC法：检测活化的Caspase-3（关键凋亡执行蛋白）。
- 定位：主要在腺上皮细胞。
- 量化：计算凋亡阳性细胞数或百分比（凋亡指数）。
- 意义：评估增生组织中细胞增殖/凋亡的动态平衡是否被打破（增殖↑，凋亡↓）。

雄激素受体
- 方法：免疫组织化学（定位）和/或蛋白质印迹、实时荧光定量PCR（定量）。
- 目的：评估AR在腺上皮细胞核及间质细胞中的蛋白表达与定位（关键通路活化标志）。
5α-还原酶
- 方法：实时荧光定量PCR检测（主要检测II型，SRD5A2）或酶活性测定（组织匀浆）。
- 意义：催化睾酮转化为活性更强的双氢睾酮（DHT）。
生长因子及相关信号分子
- 常用指标：
  - EGF / EGFR：表皮生长因子及其受体。
  - FGF-2 / FGFR：碱性成纤维细胞生长因子及其受体。
  - TGF-β / TGF-βR / Smads：转化生长因子β及其信号通路分子（影响增殖、分化、纤维化）。
  - IGF-1 / IGF-1R：胰岛素样生长因子1及其受体。
- 方法：免疫组织化学、蛋白质印迹、实时荧光定量PCR。
- 意义：评估雄激素下游促生长或纤维化信号通路的激活状态。
炎症相关因子
- 常用指标：TNF-α, IL-1β, IL-6, COX-2（前列腺素合成关键酶）。
- 方法：实时荧光定量PCR（mRNA）、酶联免疫吸附试验（蛋白）、免疫组织化学（定位）。
- 意义：评估慢性炎症在增生发生发展中的作用。

排尿功能
- 代谢笼法：收集24小时尿量，测量单次排尿量、排尿次数（反映下尿路症状）。
- 清醒动物尿流动力学（技术复杂）：评估膀胱内压、排尿压力、残余尿量等。

标准化取材：处死时间、麻醉方式统一；前列腺各分叶精确分离并称重。
组织固定：推荐4%多聚甲醛（磷酸盐缓冲液配制），固定时间依组织块大小调整（一般24小时）。
分组设置：
- 假手术组：仅切开暴露睾丸但不切除。
- 去势对照组：仅去势，不给药。
- 模型组：去势 + 外源性雄激素（如丙酸睾酮，皮下注射或埋植缓释药）。
- 给药干预组：模型基础上加待测药物。