顺铂诱导大鼠白细胞减少模型的建立与检测体系

一、模型构建方案

动物选择：SPF级SD大鼠（雄雌各半），体重180-220g 关键参数： ▶ 顺铂剂量：3.5-7.0 mg/kg（依据预实验结果调整） ▶ 给药途径：单次腹腔注射或分次注射（如第1、3、5天） ▶ 对照组：等体积生理盐水腹腔注射 观察周期：给药后连续监测14天（白细胞低谷期通常出现在5-10天）

二、核心检测项目体系

（一）外周血系统分析

（二）骨髓造血功能评估

采样时间：实验终点（第14天）或低谷期（第7天） 检测项目：

1. 骨髓有核细胞计数
   • 方法：股骨冲洗液细胞计数板计数
2. 骨髓涂片分析
   • 瑞氏-吉姆萨双染色
   • 检测内容： ▶ 粒系/红系/巨核系细胞比例 ▶ 粒系幼稚细胞比例（早幼粒+中幼粒）
3. CFU-GM集落形成试验
   • 方法：骨髓单核细胞甲基纤维素半固体培养（培养7天后计数>50个细胞的集落）
   • 意义：直接反映造血祖细胞增殖能力

（三）病理学与分子机制

1. 组织病理学（HE染色）
   • 样本：股骨/胸骨（Bouin's液固定，EDTA脱钙）
   • 观察重点： ▶ 骨髓腔细胞密度 ▶ 脂肪细胞浸润程度 ▶ 巨核细胞数量
2. 血清细胞因子检测
   • 方法：酶联免疫吸附法(ELISA)
   • 指标： ▶ G-CSF（粒细胞集落刺激因子） ▶ TNF-α（肿瘤坏死因子α） ▶ IL-6（白介素6）
   • 采样时间点：72h、7d
3. 造血干细胞标志物检测
   • 方法：流式细胞术（骨髓单细胞悬液）
   • 抗体组合：CD34+ / CD45+ / CD117+

三、模型验证标准

1. 成功判定：
   • WBC降至基线值的40%以下（通常在给药后5-7天）
   • 中性粒细胞绝对值<1.5×10⁹/L
   • 骨髓涂片显示粒系增生减低
2. 动态特征：
   • 第3天：WBC开始显著下降
   • 第5-7天：低谷期（WBC最低值）
   • 第10-14天：逐渐恢复至80%基线值

四、关键技术注意事项

1. 采血标准化：
   • 尾静脉/眼后丛静脉采血，统一清晨8-10点操作
   • EDTA抗凝管保存（2h内完成检测）
2. 骨髓采样规范：
   • 处死后立即取股骨，冰PBS冲洗避免凝血
   • 涂片厚度以细胞单层分布为宜
3. 数据分析要点：
   • 白细胞变化曲线需包含±标准差
   • 组间比较采用重复测量方差分析

五、应用场景建议

该模型适用于：

1. 升白细胞药物筛选
2. 造血保护剂机制研究
3. 骨髓抑制预警生物标志物探索
4. 化疗辅助药物联合用药方案评价

伦理声明：所有操作需经动物伦理委员会审批（提供伦理批号），遵循"3R原则"。动物饲养环境：温度22±2℃，湿度50±10%，12h光暗循环，自由饮水进食。

本方案通过多维度检测体系（外周血-骨髓-分子）全面表征白细胞减少病理进程，各检测项目均采用通用实验方法，数据可重复性强，满足药理毒理学研究规范要求。