腺嘌呤诱导的肾衰模型（大鼠）

腺嘌呤诱导的大鼠肾衰竭模型构建与检测指标体系

一、模型原理 腺嘌呤通过口服摄入后，在体内代谢产生难溶性化合物 2,8-二羟基腺嘌呤 (2,8-DHA)。该物质在肾小管中结晶沉积，引发肾小管阻塞、间质炎症及进行性纤维化，最终导致肾功能进行性下降，成功模拟人类慢性肾病（CKD）的病理特征。

二、模型构建关键参数

• 动物：成年SD或Wistar大鼠（雄性常用），体重180-220g
• 造模剂：腺嘌呤（纯度≥98%）
• 剂量：0.25%-0.75% (w/w) 混入标准饲料
• 周期：21-28天
• 对照组：等量溶剂处理的正常饲料喂养

三、核心检测项目与标准方法 （一）基础生理指标

1. 体重变化

   • 方法：隔日称重，绘制生长曲线
   • 意义：评估全身代谢状态，肾衰大鼠体重增长显著抑制

2. 肾脏指数

   • 方法：处死后取双肾称重，计算 肾重/体重比 (KW/BW)
   • 意义：反映肾脏水肿/萎缩程度

（二）血液生化检测

1. 肾功能标志物

   • 血清肌酐 (SCr)：苦味酸法（Jaffe法）或酶法
   • 血尿素氮 (BUN)：脲酶-波氏比色法
   • 尿酸 (UA)：尿酸酶-过氧化物酶法
   • 意义：直接反映肾小球滤过功能损伤程度

2. 电解质与酸碱平衡

   • 血钾 (K⁺)、血磷 (P)：离子选择性电极法
   • 二氧化碳结合力 (CO₂CP)：酶标仪比色法
   • 意义：评估肾衰继发的代谢紊乱

（三）尿液生化与沉渣分析

1. 24小时尿蛋白定量
   • 方法：代谢笼收集尿液，磺基水杨酸法或BCA法检测
2. 尿肌酐 (UCr)
   • 方法：同血清肌酐检测
3. 肌酐清除率 (CCr)
   • 公式：CCr = (UCr × 尿量) / (SCr × 1440) → 校正为 肾脏功能单位
4. 尿NAG酶活性
   • 方法：对硝基苯酚比色法
   • 意义：敏感反映肾小管上皮细胞损伤
5. 尿沉渣镜检
   • 重点观察：2,8-DHA结晶、管型、红细胞

（四）肾脏组织病理学检测（金标准）

1. 样本处理
   • 4%多聚甲醛固定 → 石蜡包埋 → 4μm切片
2. 染色方法：
   • HE染色：观察肾小管扩张、结晶沉积、炎性浸润
   • PAS染色：凸显基底膜增厚及管型结构
   • Masson三色染色：量化间质胶原沉积（蓝染区域）
3. 组织学评分（半定量）：
   • 肾小管损伤指数（0-4分）：包括变性、坏死、管型形成
   • 间质纤维化面积比（ImageJ软件分析）

（五）分子机制相关检测

1. 氧化应激指标
   • 肾组织匀浆检测：
     • 超氧化物歧化酶 (SOD) 活性（黄嘌呤氧化酶法）
     • 丙二醛 (MDA) 含量（硫代巴比妥酸法）
2. 炎症因子
   • 血清/肾组织：ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β
3. 纤维化标志物
   • qPCR：TGF-β1、Collagen I、α-SMA mRNA表达
   • 免疫组化/免疫荧光：α-SMA、Fibronectin蛋白定位

四、模型验证要点

1. 成功标志：
   • SCr与BUN显著高于对照组（通常升高2-3倍）
   • 病理确认肾小管广泛结晶沉积及间质纤维化
2. 排除标准：
   • 腺嘌呤剂量不足→损伤不可逆性不足
   • 并发肝损伤→需检测ALT/AST排除

五、注意事项

1. 腺嘌呤对湿度敏感，需避光干燥保存，配制饲料时需混合均匀。
2. 对照组需同步进行尿液收集操作，避免应激导致的生理偏差。
3. 组织采样时需快速分离肾脏，避免自溶影响病理结果。

六、适用研究方向

• 肾小管间质纤维化机制
• 慢性肾病药物（抗炎/抗纤维化）疗效评价
• 肾脏氧化损伤与保护策略

本模型通过多维度检测体系（生理→生化→组织→分子）完整评估肾损伤进程，严格规范的检测方法是保证实验结果可重复性的关键。文中所述方法均为学术界通用技术，可根据实验室条件选择适配方案。