急毒，长毒，一般毒理

急毒、长毒与一般毒理研究：核心检测项目详解

毒理学研究是评估化学物质、药品或其它潜在有害物质安全性的基石，主要包括急性毒性试验（急毒）、长期毒性试验（长毒）及贯穿各类研究的一般毒理检测项目。以下重点阐述其核心检测内容，确保符合规范要求。

一、 急性毒性试验 (Acute Toxicity Study)

• 目的： 确定单次或24小时内多次接触受试物后产生的立即或短期有害效应，重点关注致死剂量（如LD50）和中毒症状。
• 核心检测项目：
  • 临床观察：
    • 中毒症状： 详细记录接触后出现的行为变化（抑郁、亢奋、共济失调）、神经系统症状（震颤、抽搐、麻痹）、自主神经系统症状（流泪、流涎、竖毛）、呼吸系统症状（呼吸困难、呼吸急促/抑制）、消化系统症状（呕吐、腹泻）等，记录出现时间、严重程度、持续时间。
    • 死亡情况： 记录死亡时间、大体病变（肉眼可见损伤）。
  • 体重变化： 记录染毒前后及试验期间动物的体重变化。
  • 大体解剖： 试验结束时（通常14天观察期），对所有动物（包括中途死亡动物）进行系统的大体解剖，观察主要脏器（心、肝、脾、肺、肾、脑、胃肠、生殖器官等）是否存在肉眼可见病变（如出血、肿胀、变色、坏死）。
  • 组织病理学检查 (通常在高剂量组和对照组，或发现病变时)： 对肉眼观察有异常或靶器官（基于预判或临床观察）的组织进行显微镜下检查，确认组织损伤。
  • 致死剂量计算： 通过适宜统计方法（如Bliss法、上下法、固定剂量法）计算半数致死剂量（LD50）或进行剂量范围探索。

二、 长期毒性试验 (Long-term Toxicity Study / Repeated Dose Toxicity Study)

• 目的： 评估重复接触受试物（通常持续动物生命周期的一段时间，如14天、28天、90天、6个月、1年或更长）对机体产生的累积毒性效应、潜在靶器官毒性、剂量-反应关系及无明显损害作用剂量（NOAEL）。
• 核心检测项目：
  • 一般临床观察：
    • 每日至少进行一次详细的临床症状观察（外观、行为、活动、排泄物、分泌物等）。
    • 定期（通常每周）测量体重和摄食量（计算食物利用率）。
    • 测量饮水量（若受试物经水给予）。
  • 眼科检查： 试验开始前和结束时，通常对所有动物进行眼科检查（裂隙灯、检眼镜），评估对眼睛的影响。
  • 血液学检测：
    • 红细胞系统： 红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞压积、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度、网织红细胞计数。
    • 白细胞系统： 白细胞总数及其分类计数（中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）。
    • 凝血系统： 凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、血小板计数。
  • 血液生化学检测：
    • 电解质/酸碱平衡： 钠、钾、氯、钙、磷。
    • 糖代谢： 血糖。
    • 脂代谢： 总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇。
    • 蛋白质代谢： 总蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比。
    • 肝脏功能： 丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、总胆红素、直接胆红素、胆汁酸。
    • 肾脏功能： 尿素氮、肌酐。
  • 尿液分析：
    • 理化性质： 体积、外观、颜色、pH值、比重、渗透压。
    • 化学成分： 尿蛋白、尿糖、尿胆红素、尿胆原、酮体、潜血。
    • 尿沉渣镜检： 红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、结晶。
  • 体温： 通常定期监测。
  • 心电图检查（非啮齿类动物如犬、猴）： 评估心脏电生理功能。
  • 大体解剖：
    • 试验结束时，所有动物均需进行系统的大体解剖。
    • 器官称重（脏器系数计算）： 关键器官（脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢、胸腺）的绝对重量及相对重量（脏器系数=脏器重/体重）。
  • 组织病理学检查：
    • 范围： 所有大体解剖中肉眼可见病变的组织 + 所有高剂量组和对照组动物的所有主要器官/组织 + 中、低剂量组出现异常变化的靶器官。
    • 目的： 在显微镜水平详细评估组织结构和细胞形态的改变（如变性、坏死、炎症、增生、肿瘤性改变等），是确定靶器官毒性和NOAEL的关键依据。
  • 免疫毒性指标（根据受试物性质和研究目的可选）： 如免疫器官重量/系数（胸腺、脾脏）、组织病理学（淋巴结、脾脏、骨髓）、免疫球蛋白水平、淋巴细胞亚群分析等。

三、 贯穿各类研究的一般毒理检测项目

上述急毒和长毒描述中，许多项目是毒理学研究共同关注的核心，可视为“一般毒理检测”：

1. 临床体征观察： 行为、外观、活动等异常。
2. 体重与摄食/饮水量监测： 反映整体健康状况和营养状态。
3. 血液学检查： 评估造血系统功能。
4. 血液生化学检查： 评估主要脏器（肝、肾、胰腺、心脏）功能及电解质、代谢平衡。
5. 尿液分析： 评估泌尿系统功能及部分代谢状态。
6. 大体解剖： 系统检查器官大体病变。
7. 脏器系数： 敏感反映器官肥大或萎缩。
8. 组织病理学检查： 诊断毒性损伤性质、部位和严重程度的“金标准”。
9. 致死性指标（急毒为主）： LD50/LC50及死亡时间记录。

核心原则：

• GLP规范： 所有规范毒理研究必须在符合良好实验室规范的条件下进行。
• 剂量设计： 设置足够宽的剂量范围，至少包括无明显毒性效应剂量（NOAEL）、明显毒性剂量（产生可观测毒性）以及可能致死剂量（高剂量）。
• 对照组： 必须设立同期阴性（溶媒/赋形剂）对照组。必要时设立阳性对照组（方法学验证）。
• 动物模型选择： 通常采用两种动物（至少一种非啮齿类），常用啮齿类（大鼠、小鼠）和非啮齿类（犬、小型猪、非人灵长类）。
• 统计学分析： 所有定量数据均需使用适当的统计学方法进行分析比较。
• 结果解读： 结合所有检测指标的变化模式、严重程度、发生率、剂量-反应关系、时间进程、可逆性等综合判断毒性特征、靶器官和NOAEL。

总结：

急毒、长毒及一般毒理研究通过系统性的临床观察、生化和血液学检测、体液分析、大体解剖、脏器系数计算及组织病理学检查等核心项目，全面揭示受试物的急性危害潜力及长期重复暴露下的毒性谱、靶器官损伤，为评估其人体使用的安全风险、制定安全性限值（如NOAEL）提供不可或缺的科学数据基础。确保这些检测项目在严格质量控制和规范指导下实施至关重要。