免疫毒性检测

免疫毒性检测核心项目详解

免疫毒性检测系统评估外源物质（药物、化学品等）对机体免疫系统的潜在不良影响，重点关注免疫功能抑制、过度激活（如过敏、自身免疫）或紊乱。其核心检测项目可系统划分为以下三大类：

一、 免疫功能评估 旨在检测免疫系统整体功能状态及关键组分的完整性：

• 免疫器官重量与组织病理学：
  • 检测对象： 脾脏、胸腺、淋巴结、骨髓等。
  • 检测内容： 绝对重量、脏器系数（重量/体重）、显微镜下组织结构（如白髓/红髓比例、淋巴细胞密度、坏死、增生等）。重量减轻或病理损伤常提示免疫抑制。
• 外周血免疫细胞分型与计数：
  • 核心技术： 流式细胞术。
  • 检测内容：
    • 淋巴细胞亚群： T淋巴细胞（CD3+）、辅助T细胞 (Th, CD3+CD4+)、细胞毒性T细胞 (Tc, CD3+CD8+)、 B淋巴细胞 (CD19+ 或 CD20+)、自然杀伤细胞 (NK, CD3-CD16+/CD56+) 的百分比与绝对计数。评估细胞群体平衡。
    • 关键比值： CD4+/CD8+ 比值是评估免疫状态的重要指标。
• 血清免疫球蛋白定量：
  • 检测对象： IgG, IgM, IgA, IgE (尤其与过敏相关)。
  • 检测意义： 反映B细胞功能及体液免疫状态。降低提示免疫抑制，IgE显著升高常与过敏反应相关。
• 固有免疫功能检测：
  • NK细胞活性测定： 体外检测NK细胞杀伤靶细胞（如K562细胞）的能力，评估固有免疫监视功能。
  • 吞噬细胞功能： 检测中性粒细胞、单核/巨噬细胞的吞噬能力（如吞噬荧光微球、细菌）及氧化爆发活性。

二、 过敏反应检测 主要评估物质引发I型（速发型）超敏反应的潜力：

• 皮肤致敏试验：
  • 经典方法：
    • 豚鼠最大化试验 (GPMT)： 通过皮内诱导和局部激发，观察皮肤红斑、水肿等过敏反应。
    • 局部淋巴结试验 (LLNA: DA / BrdU-ELISA)： 小鼠试验，通过测量耳后引流淋巴结淋巴细胞增殖（掺入放射性标记物或BrdU）来定量致敏潜能。
  • 检测终点： 激发部位的皮肤反应强度或淋巴结细胞增殖程度。
• 被动皮肤过敏反应 (PCA)： 将致敏动物的血清（含IgE抗体）注射到正常动物皮内，再静脉注射抗原和染料。局部血管通透性增加导致染料渗出（蓝斑）证实IgE介导的反应。
• 血清特异性IgE检测： 暴露于潜在致敏物后，检测血清中针对该物质的特异性IgE抗体水平。

三、 免疫抑制与自身免疫反应检测 评估物质导致免疫功能低下或诱发自身免疫的风险：

• T细胞依赖性抗体反应 (TDAR)：
  • 核心方法： 动物模型（常用绵羊红细胞SRBC或钥孔戚血蓝蛋白KLH等作为T细胞依赖性抗原）。
  • 检测内容： 免疫后特定时间点血清中抗该抗原的特异性抗体（如IgM, IgG）滴度。是评估机体对新抗原产生适应性体液免疫应答能力的金标准，对免疫抑制敏感。
• 有丝分裂原/抗原诱导的淋巴细胞增殖试验：
  • 刺激物：
    • 有丝分裂原： 刀豆蛋白A (ConA，刺激T细胞)， 脂多糖 (LPS，刺激B细胞)， 植物血凝素 (PHA)。
    • 回顾性抗原： 如结核菌素纯蛋白衍生物 (PPD)。
  • 检测技术： 体外培养淋巴细胞，加入刺激物，通过 ^3H-胸苷掺入法或CFSE染色/流式检测细胞增殖能力。抑制提示T/B细胞功能受损。
• 混合淋巴细胞反应 (MLR)：
  • 检测目的： 评估T细胞识别同种异体抗原并发生增殖反应的能力（主要针对MHC差异）。
  • 方法： 将来自两个不同个体的淋巴细胞混合培养，测量反应性T细胞的增殖程度。抑制提示T细胞应答功能缺陷。
• 宿主抵抗力模型：
  • 原理： 给动物接种一定剂量的病原体（细菌、病毒、寄生虫）或肿瘤细胞，观察暴露于受试物后动物清除病原体或抵抗肿瘤的能力是否下降。
  • 检测意义： 综合评估免疫系统在真实感染或肿瘤挑战中的功能性结局。
• 自身抗体筛查：
  • 检测对象： 血清中的抗核抗体 (ANA)、抗双链DNA抗体 (dsDNA)、类风湿因子 (RF) 等。
  • 检测意义： 自身抗体水平升高是自身免疫反应的重要血清学标志，提示免疫耐受被打破。
• 免疫组织化学/炎症因子谱分析：
  • 组织病理学补充： 检测免疫器官或靶器官中特定免疫细胞浸润、免疫复合物沉积等。
  • 血清/血浆细胞因子： 检测促炎因子 (如TNF-α, IL-1β, IL-6, IFN-γ)、抗炎因子 (如IL-10, TGF-β) 及Th1/Th2/Th17相关因子水平，反映免疫激活或失衡状态。

应用场景： 这些检测项目主要应用于：

• 药物安全性评价： 新药临床前及临床试验阶段评估免疫毒性风险。
• 化学品安全性评估： 工业化学品、农药、化妆品原料等的注册与风险管理。
• 医疗器械生物相容性评价： 评估器械或其浸提液对免疫系统的潜在影响。
• 生物技术产品评价： 如治疗性蛋白、疫苗、细胞治疗产品的免疫原性与免疫毒性。

总结： 免疫毒性检测是一个多层面、多指标的综合性评估体系。通过系统性地考察免疫器官、细胞、分子及功能性应答的变化，可全面揭示受试物对免疫系统潜在的不良影响（抑制、过敏、自身免疫），为保障用药安全和环境健康提供关键科学依据。检测策略需依据受试物性质、暴露途径及预期用途进行科学设计和组合。