眼刺激性试验

眼刺激性试验：核心检测项目详解

眼刺激性试验是评估化学品、化妆品、药品等物质意外接触人眼后可能造成可逆性炎症损伤的关键安全评价手段。其核心在于系统观察并量化受试物对眼组织造成的损伤类型和程度，具体检测项目如下：

一、 核心检测项目（观察指标）

试验的核心在于对以下眼部结构进行细致观察和评分：

1. 角膜 (Cornea):

   • 浑浊程度 (Opacity): 这是最重要的指标。观察角膜透明度的丧失程度，记录其范围（弥散性、局部性）和密度（云状、乳状、瓷白色）。这是判断损伤严重性和是否可能导致永久性视觉损害的关键。
   • 损伤区域 (Area of Involvement): 评估角膜浑浊或溃疡覆盖的面积比例。
   • 荧光素钠染色阳性区域 (Fluorescein Staining): 使用荧光素钠染料（通常在裂隙灯显微镜下观察）检测角膜上皮是否缺损（如擦伤、溃疡）。阳性染色区域清晰显示角膜屏障受损的位置和范围。

2. 虹膜 (Iris):

   • 炎症反应 (Inflammation): 观察虹膜是否出现充血（血管扩张、发红）、肿胀、对光反应迟钝（反应性降低）、皱褶消失、眼前房渗出物或出血等炎症表现。虹膜反应是严重刺激性的重要标志。

3. 结膜 (Conjunctiva):

   • 充血 (Redness/Vascular Congestion): 观察球结膜（覆盖眼白部分）和睑结膜（覆盖眼睑内面）的血管扩张、发红程度。
   • 水肿 (Chemosis/Swelling): 评估球结膜因液体渗出而肿胀（水肿）的程度，表现为隆起、水泡样外观。
   • 分泌物 (Discharge): 记录分泌物（粘液性、脓性）的有无、类型和数量。

二、 观察与评分时间点

为了捕捉损伤的发生、发展和恢复过程，观察和评分严格按照预设的时间点进行（通常基于OECD 405或GB/T 21604标准）：

1. 染毒后1小时： 首次观察，记录即时反应。
2. 染毒后24小时：
3. 染毒后48小时：
4. 染毒后72小时：
5. 第4天和第7天： 对于出现损伤的动物，继续观察至第7天或直至所有可逆性损伤完全恢复。
6. 第21天（或必要时更长）： 如果损伤在第7天仍未完全恢复（特别是角膜损伤），需延长观察期至第21天，以评估损伤是否可逆或可能造成永久性损害（如疤痕、血管翳）。

三、 评分系统（Draize评分）

观察结果使用国际上广泛认可的Draize评分系统进行量化：

• 各部分独立评分： 角膜（浑浊度、损伤面积）、虹膜、结膜（充血、水肿）分别有特定的评分标准和最高分值（如角膜浑浊度最高分4，虹膜最高分2）。
• 总分计算： 各评分项得分相加得到该只动物单眼的刺激总分（Maximum Total Score, MTS）。不同时间点的MTS可以绘制成曲线，反映损伤的动态变化。
• 恢复判断： 通过比较不同时间点的评分变化，判断损伤是否在恢复以及恢复的速度。

四、 其他重要的检测与记录项目

• 反应性质描述： 详细记录损伤的具体表现（如角膜溃疡的形态、分泌物的性状）。
• 反应发生时间： 首次观察到阳性反应的时间点。
• 反应持续时间： 各种损伤表现从出现到消失或稳定的时间。
• 可逆性评估： 这是试验的核心目的之一。基于观察期（特别是若延长至21天）结束时角膜、虹膜、结膜损伤的恢复情况（是否完全恢复到染毒前状态）来判断刺激性是可逆的还是不可逆的（可能导致永久性损伤）。
• 体重变化： 监测动物体重变化作为整体健康状况的辅助指标。
• 大体解剖与组织病理学检查（必要时）： 对于出现严重损伤或在观察期末仍有显著异常的动物，可能需要进行大体解剖和组织病理学检查（通常不是常规要求），以更深入地了解损伤的性质和程度（如角膜基质层损伤、虹膜粘连、结膜上皮增生等）。

五、 替代方法与体外检测项目（发展方向）

鉴于动物福利要求（3R原则），大量体外替代方法被开发并验证，用于预测眼刺激性/腐蚀性：

• 鸡胚绒毛尿囊膜试验 (HET-CAM, CAM-based Tests)： 检测血管损伤（出血、凝血、血管溶解）。
• 重组人角膜上皮模型试验 (如 EpiOcular™, SkinEthic™ HCE): 检测细胞毒性（MTT或类似方法测量细胞活力）。
• 离体器官试验 (如 BCOP - 牛角膜浑浊通透性试验, ICE - 离体鸡眼试验)： 检测浑浊度增加和通透性改变（荧光素渗漏）。
• 细胞毒性试验 (如 中性红摄取试验)： 基础细胞毒性筛查。
• 基于理化特性的计算机模型 (QSARs)： 利用化学结构预测刺激性。

这些体外方法各有其特定的“检测项目”（如细胞存活率%、CAM损伤评分、浑浊度值、通透性值等），目标是模拟或预测体内试验中观察到的关键终点（特别是腐蚀性和严重刺激性）。

总结

眼刺激性试验（体内）的核心检测项目是对角膜（浑浊度、损伤、染色）、虹膜（炎症）和结膜（充血、水肿、分泌物） 在一系列标准化时间点进行系统性观察、描述和Draize评分，最终聚焦于损伤的严重程度、动态变化和可逆性判断。随着科技进步，体外替代方法提供了基于不同原理（细胞毒性、膜损伤、屏障功能破坏等）的多种“检测项目”，正逐步减少对动物试验的依赖，但其预测能力和适用范围仍需根据受试物特性谨慎选择。无论是体内还是体外方法，其目标都是准确评估物质对眼睛的潜在危害，保障产品安全。

重要提示： 动物实验必须在符合伦理规范和GLP要求的机构进行，严格遵守3R原则（替代、减少、优化）。体外替代方法的应用日益广泛，但仍需结合具体法规要求和受试物特性选择合适的测试策略。