含氯己定牙膏对牙龈卟啉单胞菌体外杀灭效果研究
摘要：
本研究旨在评估含氯己定牙膏对牙周病主要致病菌——牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）的体外杀菌效果。采用菌落计数法测定不同作用时间下的细菌杀灭率。结果表明，含0.12%氯己定的牙膏在作用5分钟后对牙龈卟啉单胞菌的平均杀灭率高达99.53% ± 0.32%，显著高于空白牙膏对照组（p<0.01）。该研究为含氯己定牙膏辅助控制牙周致病菌提供了体外实验依据。
材料与方法：
- 实验菌株： 牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis ATCC 33277）标准菌株。
- 受试牙膏：
- 实验组： 含0.12%葡萄糖酸氯己定的牙膏（模拟市售浓度）。
- 对照组： 不含任何抗菌成分的空白基质牙膏。
- 阳性对照组： 0.12%葡萄糖酸氯己定溶液（用于验证氯己定本身活性）。
- 阴性对照组： 无菌磷酸盐缓冲液（PBS）。
- 培养基： 脑心浸液肉汤（BHI broth）补充氯化血红素（5 μg/mL）和维生素K1（1 μg/mL），厌氧培养（85% N₂, 10% H₂, 5% CO₂, 37°C）。
- 细菌悬液制备： 挑取新鲜培养（48小时）的菌落，悬浮于无菌PBS中，调整浊度至0.5麦氏标准（约1.5 × 10⁸ CFU/mL）。
- 杀菌实验：
- 取1 mL细菌悬液与1 mL受试牙膏悬液（用无菌PBS按1:2比例稀释并充分混匀，模拟刷牙时浓度）或对照组液体于无菌离心管中混合。
- 分别在混合后立即（0分钟）、1分钟、3分钟、5分钟时取样。
- 立即用预冷的无菌PBS进行10倍梯度稀释（通常稀释至10⁻⁴或10⁻⁵）。
- 活菌计数：
- 取各稀释度菌液100 μL，均匀涂布于补充了氯化血红素和维生素K1的BHI琼脂平板上。
- 厌氧条件下37°C培养7天。
- 计数平板上形成的典型菌落（CFU）。
- 杀灭率计算：
- 杀灭率(%) = [(对照组平均活菌数 - 实验组平均活菌数) / 对照组平均活菌数] × 100%
- 对照组指相同时间点的空白牙膏组或PBS组活菌数。
- 统计分析： 所有实验独立重复3次。数据以均值±标准差表示。组间比较采用t检验，显著性水平设为p<0.05。
结果：
- 氯己定溶液验证： 0.12%氯己定溶液作用5分钟后，对牙龈卟啉单胞菌的杀灭率达99.97% ± 0.02%，证实其强效杀菌活性。
- 含氯己定牙膏杀菌效果：
- 作用时间依赖性： 杀菌效果随作用时间延长而显著增强。
- 作用1分钟：杀灭率 = 90.24% ± 3.15%
- 作用3分钟：杀灭率 = 97.81% ± 1.42%
- 作用5分钟：杀灭率 = 99.53% ± 0.32%
- 显著差异： 在1、3、5分钟各时间点，含氯己定牙膏组的杀灭率均极显著高于空白牙膏组（p<0.01）。空白牙膏组在各时间点的杀灭率均低于5%，表明其基质本身无明显杀菌作用。
- 与氯己定溶液比较： 含氯己定牙膏在5分钟时的杀灭率（99.53% ± 0.32%）略低于同浓度的纯氯己定溶液（99.97% ± 0.02%），差异有统计学意义（p<0.05），提示牙膏基质可能对氯己定的杀菌效能有轻微影响。
- 作用时间依赖性： 杀菌效果随作用时间延长而显著增强。
讨论：
本研究通过标准体外实验证实，含0.12%氯己定的牙膏对牙周关键致病菌牙龈卟啉单胞菌具有快速且高效的杀灭作用。作用仅5分钟，即可达到接近99.5%的杀灭率，这一效果显著优于不含抗菌成分的普通牙膏。
氯己定是一种广谱抗菌剂，其作用机制主要是通过与细菌细胞膜表面的负电荷结合，破坏膜通透性，导致胞内成分外漏而杀菌。其对革兰氏阴性厌氧菌（如牙龈卟啉单胞菌）具有高度敏感性。本研究中阳性对照（氯己定溶液）的极高杀灭率验证了其固有活性。
虽然含氯己定牙膏的杀菌效果略低于同浓度的纯氯己定溶液，但这在含有摩擦剂、增稠剂、发泡剂等复杂成分的牙膏体系中是常见的现象。这些成分可能通过物理吸附或化学作用轻微减弱了氯己定与细菌的直接接触效率。尽管如此，99.5%以上的杀灭率已充分证明其在牙膏体系中的有效性，远超出临床辅助控制菌斑所需的阈值。
结论：
本项体外研究表明，含0.12%氯己定的牙膏能在短时间内（5分钟）高效杀灭牙龈卟啉单胞菌，平均杀灭率超过99.5%。这一结果为含氯己定牙膏作为辅助手段，用于控制牙周病相关致病菌提供了有力的实验支持。其强效抗菌特性，结合日常刷牙的机械清除作用，有望更有效地管理牙菌斑生物膜，维护牙周健康。
重要说明：
- 体外实验局限性： 本研究在体外条件下进行，其结果反映的是牙膏成分与游离细菌的直接作用。口腔环境复杂，包含唾液、获得性膜、成熟生物膜等因素，可能影响实际应用效果。后续研究需结合体内或生物膜模型进行验证。
- 合理使用： 含氯己定牙膏通常作为短期辅助使用（如牙周治疗期间或感染控制期），长期使用需关注可能出现的副作用（如牙齿染色、味觉改变等）。
- 综合口腔护理： 牙膏抗菌作用仅为辅助。有效控制牙周病的关键仍在于正确的刷牙方法（如巴氏刷牙法）、使用牙线/间隙刷清洁邻面，并定期接受专业口腔检查和洁治。