以下是一篇完整的关于“LPS联合ATP诱导小鼠局部及系统性炎症”的实验研究方案，内容严格遵循学术规范，不包含任何企业或商业信息：

脂多糖联合三磷酸腺苷诱导小鼠局部及系统性炎症的实验研究方案

一、引言

炎症反应是机体抵御病原体入侵的重要防御机制，但其过度激活可导致组织损伤和全身性疾病。脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）作为革兰氏阴性菌外膜的主要成分，可通过激活Toll样受体4（TLR4）信号通路诱导炎症因子释放。三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate, ATP）作为损伤相关分子模式（DAMP），通过结合嘌呤能受体P2X7触发NLRP3炎症小体活化。两者联合使用可模拟细菌感染后炎症级联放大效应，建立稳定的小鼠炎症模型，用于研究炎症调控机制及药物干预效果。

二、材料与方法

1. 实验动物

品系：C57BL/6雄性小鼠（8-10周龄，体重20–22 g）
饲养条件：SPF级环境，恒温（22±1°C）、12 h光照周期，自由摄食饮水
伦理审批：所有实验程序经机构动物伦理委员会批准（批件号：IACUC-XXXX）

2. 主要试剂

脂多糖（LPS）：来源于大肠杆菌血清型O111:B4
三磷酸腺苷（ATP）：无菌无热源制剂
磷酸盐缓冲液（PBS）：pH 7.4
细胞因子检测试剂盒：IL-1β, TNF-α, IL-6 ELISA试剂盒

3. 模型构建流程

(1) 系统性炎症模型

LPS预刺激：
- 腹腔注射LPS（1 mg/kg，溶于50 μL PBS）
- 对照组注射等体积PBS
ATP二次刺激：
- LPS注射后4小时，腹腔注射ATP（50 mg/kg，溶于50 μL PBS）

(2) 局部炎症模型（耳部肿胀模型）

LPS耳部预处理：
- 小鼠右耳廓皮下注射LPS（10 μg/耳，溶于10 μL PBS）
- 左耳注射PBS作为自身对照
ATP激发炎症：
- LPS注射后30分钟，同部位注射ATP（1 mmol/耳，溶于10 μL PBS）
肿胀度检测：
- 注射ATP后60分钟，测量双侧耳厚度差值（千分尺）

4. 样本采集与检测

血清采集：ATP注射后2小时取血，离心分离血清
组织取材：取肝、肺、脾组织，4%多聚甲醛固定或液氮冻存
指标检测：
- ELISA：血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平
- 组织学分析：H&E染色观察炎性细胞浸润
- RT-qPCR：检测炎症基因（Il1b, Tnf, Nlrp3）表达

5. 统计学分析

数据以Mean ± SEM表示，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）及Tukey事后检验（GraphPad Prism 9.0），p < 0.05为显著差异。

三、预期结果

系统性炎症表型：
- LPS/ATP组血清IL-1β、TNF-α显著升高（vs 单用LPS或对照组，p < 0.01）
- 肝、肺组织可见中性粒细胞及巨噬细胞浸润
局部炎症表型：
- LPS+ATP注射耳厚度增加 >100%（vs PBS对照组，p < 0.001）
- 耳组织炎症小体活化标志物caspase-1表达上调

四、机制讨论

该模型通过双信号协同作用模拟炎症爆发：

Priming信号：LPS激活TLR4→NF-κB通路→上调pro-IL-1β及NLRP3表达
Activation信号：ATP结合P2X7受体→K⁺外流→NLRP3炎症小体组装→caspase-1激活→IL-1β成熟释放
此过程可有效模拟败血症、急性肺损伤等疾病的炎症级联反应，为抗炎药物筛选提供可靠模型。

五、实验注意事项

ATP稳定性：现用现配，避免反复冻融降解
注射操作：严格无菌操作，避免非特异性感染
时间窗口：LPS与ATP间隔时间需严格优化（通常3–5小时）
品系差异：BALB/c小鼠对LPS敏感性高于C57BL/6

六、结论

LPS联合ATP通过协同激活先天免疫信号通路，可快速诱导小鼠局部及系统性炎症反应。该模型操作简便、重复性好，适用于炎症机制研究及药物药效学评价，尤其为靶向NLRP3炎症小体的治疗策略提供关键实验平台。

参考文献（示例，需补充具体文献）

Franchi L. et al. (2009) Immunity 30(4):556–565.
Jo EK. et al. (2016) Exp Mol Med 48(11):e269.
Baroja-Mazo A. et al. (2014) Nat Commun 5:3209.

说明：

全文未涉及任何商品化试剂公司名称，符合学术写作规范。
关键参数（剂量、时间点）需根据预实验结果优化。
动物福利部分需明确麻醉/镇痛方案（如异氟烷吸入麻醉）。

此方案可根据具体研究方向拓展检测指标（如流式细胞术分析免疫细胞亚群、Western blot检测通路蛋白等）。