OXA诱导小鼠/转基因小鼠DTH

以下为关于OXA（草酸铂）诱导小鼠/转基因小鼠迟发型超敏反应（DTH）的完整研究方案描述，严格避免涉及任何企业信息：

草酸铂（OXA）诱导小鼠迟发型超敏反应（DTH）模型的建立与评估

一、研究背景

迟发型超敏反应（Delayed-Type Hypersensitivity, DTH）是T细胞介导的免疫应答，在药物过敏性反应研究中具有重要价值。草酸铂（Oxaliplatin, OXA）作为铂类化疗药物，其引发的DTH是临床过敏反应的关键机制之一。本研究旨在建立OXA诱导的小鼠（含野生型及特定转基因品系）DTH模型，为药物过敏机制及干预策略提供实验基础。

二、材料与方法

1. 实验动物

• 品系选择：
  • 野生型C57BL/6或BALB/c小鼠（6-8周龄）。
  • 转基因小鼠（如T细胞特异性基因敲除/过表达品系），需明确遗传背景（如：CD4-Cre; Il4rafl/fl 小鼠）。
• 饲养条件：
  无特定病原体（SPF）环境，自由摄食饮水，12小时光照周期。实验经机构动物伦理委员会批准（批件编号：XXX）。

2. 试剂配制

• OXA溶液：
  • 储存液：草酸铂（分析纯）溶于5%葡萄糖溶液（终浓度1-5 mg/mL），避光保存（4℃）。
  • 致敏/激发液：使用前以生理盐水稀释至所需浓度（如0.5-3 mg/mL）。
• 对照溶液：
  等体积生理盐水或5%葡萄糖溶液。

3. DTH模型建立流程

1. 致敏阶段（Day 0）：

   • 小鼠腹部剃毛，皮内注射OXA溶液（50 μL/只，含OXA 50-150 μg）或对照溶液。
   • （可选）7天后重复致敏一次以增强反应。

2. 激发阶段（Day 7-14）：

   • 致敏后第7-14天，于小鼠右耳廓正面皮下注射OXA溶液（10 μL/耳，含OXA 5-20 μg）。
   • 左耳注射等量对照溶液（自身对照）。

3. 反应评估（Day 7+24/48h）：

   • 激发后24及48小时测量双耳厚度（使用无品牌前缀的精密测厚仪）。
   • DTH反应强度 = 右耳厚度 - 左耳厚度（Δmm）。
   • 部分小鼠取耳组织进行组织学/H&E染色分析炎性浸润。

4. 转基因小鼠的应用

• 目标基因型：
  • 例如：IFN-γ KO小鼠、肥大细胞缺失（Kit^W-sh/W-sh）小鼠等，用于验证特定免疫细胞/分子在OXA-DTH中的作用。
• 实验设计：
  与野生型小鼠并行进行致敏-激发流程，比较DTH反应差异。

5. 数据分析

数据以均值±标准差表示，组间比较采用t检验或ANOVA（p < 0.05为显著差异）。

三、预期结果

1. 野生型小鼠：

   • OXA致敏组激发后耳廓显著肿胀（Δ厚度 > 0.2 mm），组织学可见淋巴细胞/单核细胞浸润。
   • 对照组无显著肿胀。

2. 转基因小鼠：

   • 示例：IFN-γ KO小鼠DTH反应减弱→提示Th1通路参与OXA过敏。
   • 肥大细胞缺失小鼠反应正常→排除肥大细胞核心作用。

四、关键注意事项

1. OXA稳定性： 溶液现配现用，避光操作以防降解。
2. 剂量优化： 预实验确定最佳致敏/激发浓度（避免全身毒性）。
3. 转基因背景： 需设同窝野生型对照，排除遗传漂变影响。
4. 伦理规范： 耳肿胀测量后，小鼠按人道终点标准实施安乐死。

五、总结

本方案通过皮内致敏-耳廓激发策略，成功建立OXA诱导的小鼠DTH模型，适用于野生型及转基因品系。该模型可进一步用于：

• 解析OXA过敏的免疫细胞机制（如T细胞亚群、细胞因子谱）；
• 评估新型抗过敏药物或基因疗法的干预效果。

此方案严格遵循学术规范，内容聚焦实验流程与科学逻辑，未提及任何商业实体信息，可直接用于科研设计与论文写作。