牛磺去氧胆酸/牛磺脱氧胆酸（TDCA）检测

发布时间：2025-06-28 08:01:39 阅读量：3 作者：生物检测中心

牛磺去氧胆酸（TDCA）检测：原理、应用与临床意义

牛磺去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic Acid, TDCA）是人体内重要的结合型胆汁酸之一，由脱氧胆酸（CDCA）与牛磺酸在肝脏中结合而成。作为胆汁酸代谢通路中的关键分子，TDCA的水平变化直接反映肝胆系统功能、肠道吸收状态及肠道菌群活性。准确检测TDCA浓度对于多种疾病的诊断、鉴别诊断及疗效观察具有重要意义。

一、 TDCA的生物学特性与代谢

胆汁酸主要在肝脏合成，以胆固醇为前体，经多步酶促反应生成初级胆汁酸（胆酸CA、鹅脱氧胆酸CDCA），进而与甘氨酸或牛磺酸结合形成结合型胆汁酸（如甘氨胆酸、TDCA等）。这些结合型胆汁酸随胆汁排入肠道，大部分在回肠末端被重吸收（肠肝循环），少部分进入结肠经细菌作用解离、脱羟生成次级胆汁酸（如脱氧胆酸DCA、石胆酸LCA）。TDCA作为CDCA的结合形式，其浓度受到肝细胞功能、胆道通畅度、肠道菌群活性及肠肝循环效率的综合影响。

二、 TDCA检测的核心原理与方法学

现代临床实验室主要采用以下高灵敏度、高特异性的分析技术检测TDCA：

  1. 液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）：

    • 原理： 样本（血清、血浆、尿液、胆汁等）经前处理（如沉淀蛋白、固相萃取）后，通过高效液相色谱（HPLC）分离TDCA及其他胆汁酸组分。分离后的TDCA进入质谱仪，在离子源（如电喷雾离子源ESI）作用下离子化，形成的母离子在碰撞室碎裂产生特征性子离子（碎片离子）。通过监测特定的母离子-子离子对（质荷比m/z）进行定性和定量分析。
    • 优势： 黄金标准方法。特异性极高，能精准区分TDCA与其他结构相似的胆汁酸（如甘氨脱氧胆酸GDCA）；灵敏度高，可检测低丰度样本；可同时定量多种胆汁酸组分（胆汁酸谱分析），提供更全面的代谢信息。
    • 应用： 临床诊断、代谢组学研究、药物代谢研究等。

  2. 酶循环法/酶比色法：

    • 原理： 利用3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）特异性氧化TDCA的3α-羟基基团，生成3-羰基化合物和还原型辅酶I（NADH）。NADH在黄递酶（Diaphorase）存在下，可将四唑盐（如INT或MTT）还原生成有色甲臜（formazan）染料。溶液颜色的深浅（通常在500-550nm处有最大吸收峰）与TDCA浓度成正比。
    • 优势： 常用于自动化生化分析平台，操作相对简便、快速；成本通常低于LC-MS/MS；适合大规模常规筛查。
    • 注意： 此法检测的是总3α-羟基胆汁酸（包括TDCA、GDCA、TCA、GCA等多种）。直接特异性检测TDCA通常还需结合色谱分离或特异性抗体（如用于酶免疫法）。

  3. 高效液相色谱法（HPLC）结合紫外/荧光检测：

    • 原理： 样本前处理后，经HPLC分离TDCA。若TDCA本身紫外吸收弱，常需进行衍生化反应（如与溴代苯乙酮或硝基苯肼反应），生成带有强紫外吸收或荧光特性的衍生物，再进行检测。
    • 应用： 在LC-MS/MS普及前应用较多，目前仍是一些实验室的选择。
 

三、 TDCA检测的核心临床价值

  1. 肝胆系统疾病的诊断与鉴别诊断：

    • 胆汁淤积性疾病： 肝内/肝外胆汁淤积（如原发性胆汁性胆管炎PBC、原发性硬化性胆管炎PSC、胆道闭锁、胆管结石、胆管癌等）时，胆汁酸排泄受阻，血清TDCA显著升高（常伴其他胆汁酸升高）。其升高程度有助于评估淤积的严重性。
    • 肝细胞损伤： 急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化等导致肝细胞摄取、合成和排泄胆汁酸能力下降，血清总胆汁酸（TBA）及TDCA升高。TDCA/TBA比值或其他特定胆汁酸谱模式可能有助于病因鉴别（如病毒性肝炎、药物性肝损、酒精性肝病）。
    • 儿童胆汁淤积性肝病： 血清胆汁酸（特别是结合型胆汁酸如TDCA）是诊断新生儿及婴儿胆汁淤积的重要指标，显著升高常提示严重肝病（如胆道闭锁、Alagille综合征、进行性家族性肝内胆汁淤积症PFIC）。动态监测对评估疾病进展和治疗反应很重要。

  2. 肠道疾病与消化吸收功能评估：

    • 肠道菌群失调： 小肠细菌过度生长（SIBO）时，细菌过早解离结合胆汁酸并代谢初级胆汁酸，可能导致血清TDCA降低（进入肠肝循环减少），而次级胆汁酸升高。
    • 小肠病变/短肠综合征： 回肠末端是胆汁酸主要重吸收部位。回肠疾病（如克罗恩病）、手术切除后，胆汁酸重吸收障碍，粪便排泄增加，血清TDCA水平可能降低。
    • 脂肪泻： 胆汁酸缺乏（合成减少、排泄过多或重吸收障碍）是脂肪泻的重要原因之一。检测TDCA等胆汁酸可作为辅助诊断依据。

  3. 代谢相关研究与筛查：

    • 胆固醇代谢监控： 胆汁酸是胆固醇的主要排泄途径。胆汁酸合成或肠肝循环异常可能影响胆固醇稳态。
    • 遗传性胆汁酸代谢缺陷： 如β-酮硫解酶缺乏症（导致异常胆汁酸积累）、Zellweger综合征（过氧化物酶体障碍影响胆汁酸合成），特定胆汁酸谱（包括TDCA异常）有诊断提示意义。
 

四、 样本采集、处理与注意事项

  • 样本类型： 最常用的是血清或血浆（肝素或EDTA抗凝）。避免溶血和脂血。尿液（24h尿或随机尿）、胆汁也可检测，需特殊处理。
  • 采集： 空腹采集（通常要求禁食>8小时，饮水除外），以减少餐后胆汁酸生理性升高的影响。采样后尽快分离血清/血浆。
  • 保存： 分离后的血清/血浆应立即检测。若需保存，应置于-20°C或更低温度（-80°C最佳）冷冻。避免反复冻融。
  • 稳定性： TDCA在冷藏（4°C）下可短暂保存（通常建议<72小时），长期保存需冷冻。
 

五、 结果解读要点

  • 参考区间： 需参考检测实验室建立的基于特定人群和方法学的参考范围。不同方法、不同人群（年龄、性别、地域）结果可能有差异。以下仅为示例（具体数值请务必以报告实验室为准）：
    • 空腹血清TDCA：成人通常在0.1 - 1.0 μmol/L范围（LC-MS/MS法）。儿童，尤其是新生儿和婴儿，水平可能高于成人。
  • 升高解读： 主要见于肝胆疾病（胆汁淤积、肝细胞损伤）、门体分流（如肝硬化的侧枝循环开放）、部分药物影响（如利福平、环孢素）。
  • 降低解读： 相对少见，可见于严重肝衰竭（合成能力极度低下）、回肠切除/病变（重吸收障碍）、部分胆汁酸螯合剂治疗期间、特定遗传代谢病。
  • 综合分析： 结合患者临床表现（黄疸、瘙痒、腹痛、腹泻、脂肪泻等）、其他肝功能指标（ALT、AST、ALP、GGT、胆红素、白蛋白、凝血功能）、影像学检查（超声、CT、MRCP）及其他胆汁酸组分（胆汁酸谱分析价值更大）等进行综合判断。
 

六、 质量控制与局限性

  • 质量控制： 严格的室内质控（IQC）和室间质评（EQA）/能力验证（PT）对保证结果准确性至关重要。
  • 局限性：
    • 方法特异性差异： 酶法只能测总3α-羟基胆汁酸，LC-MS/MS特异性高。
    • 生理波动： 餐后、昼夜节律、运动等可引起生理性波动，故强调空腹采样。
    • 干扰因素： 严重溶血、脂血、某些药物可能干扰检测。
    • 无法定位病因： TDCA升高提示肝胆肠功能障碍，但不能直接指明具体病因（如病毒性肝炎还是药物性肝损），需结合其他检查。
    • 样本稳定性： 处理不当或保存不当会影响结果。
 

七、 未来发展与展望

TDCA检测技术正朝着更高通量、更低成本、即时检测（POCT）方向发展。LC-MS/MS仍将是精准检测的金标准，其自动化程度和通量持续提升。基于特异性抗体的快速检测方法（如侧流层析）可能在特定场景（如新生儿筛查、床旁检测）发挥作用。更重要的是，胆汁酸谱分析而非单一胆汁酸检测，正日益成为研究和临床实践的重点。通过同时定量多种初级、次级、结合型胆汁酸，可以描绘更全面的胆汁酸代谢图谱，为疾病的精准分型、机制研究、疗效监测和预后评估提供更强大的工具。对胆汁酸-肠道菌群-宿主相互作用的深入研究，也将进一步拓展TDCA等胆汁酸检测在代谢性疾病（如肥胖、糖尿病、NAFLD/NASH）、自身免疫病甚至神经精神疾病领域的应用潜力。

结论：

牛磺去氧胆酸（TDCA）检测是评估肝胆功能和肠道健康的重要工具。现代分析技术，尤其是LC-MS/MS，提供了高特异性、高灵敏度的检测能力。TDCA水平的变化主要反映胆汁酸合成、分泌、重吸收和代谢环节的异常，对胆汁淤积性疾病、肝细胞损伤、特定肠道疾病及相关代谢紊乱具有重要的诊断、鉴别诊断和监测价值。正确的样本采集、处理以及结合临床背景的综合分析是结果解读的关键。随着技术的进步和对胆汁酸代谢网络认识的深入，TDCA作为胆汁酸谱中的重要一员，将在精准医学中发挥越来越重要的作用。

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