兔单抗制备服务 - 中析研究所生物检测中心

以下是一篇关于兔单抗制备服务中检测项目的详细技术解析文章：

兔单抗制备服务中的关键检测项目解析

兔单克隆抗体（Rabbit mAb）因其高亲和力、特异性及靶标识别多样性，在基础研究、诊断试剂和药物开发中广泛应用。然而，抗体制备过程中的质量控制至关重要，直接影响抗体性能和应用可靠性。本文将系统性解析兔单抗制备服务中的核心检测项目及其技术意义。

一、制备流程概述

典型的兔单抗制备流程包括：抗原设计与制备→动物免疫→淋巴细胞分离与融合→杂交瘤筛选→单克隆化→抗体生产与纯化→质控检测。其中，检测项目贯穿全程，是确保抗体功能的核心环节。

二、核心检测项目与技术方法

抗原质量验证
- 检测内容：抗原纯度、稳定性、免疫原性。
- 方法：SDS-PAGE（纯度≥90%）、HPLC（分子量分布）、质谱（序列验证）、ELISA（免疫反应性）。
- 意义：高纯度抗原是诱导特异性抗体的前提。
免疫应答监测（血清效价检测）
- 检测内容：血清中抗体滴度及动态变化。
- 方法：间接ELISA（定量分析）、免疫印迹（Western Blot）。
- 标准：通常要求血清效价≥1:10^5方可进入融合阶段。
杂交瘤筛选与单克隆性确认
- 检测内容：抗体分泌能力、单克隆性。
- 方法：有限稀释法（3次以上亚克隆）、单细胞分选（流式细胞术）、染色体核型分析（杂交瘤稳定性）。
- 关键点：排除多克隆或非特异性分泌细胞株。
抗体特异性验证
- 检测内容：靶标结合特异性及交叉反应性。
- 方法：
  - ELISA：检测靶蛋白与同源家族蛋白的交叉反应。
  - Western Blot：验证抗体对天然/变性蛋白的特异性。
  - 免疫组化/免疫荧光（IHC/IF）：组织或细胞定位特异性。
  - 肽段竞争实验：通过预先孵育靶标肽段验证表位结合能力。
亲和力测定
- 检测原理：量化抗体-抗原结合强度（平衡解离常数KD）。
- 方法：
  - 表面等离子体共振（SPR）：实时监测结合动力学（ka/kd）。
  - 生物膜干涉技术（BLI）：无需标记的高通量检测。
  - ELISA竞争法：半定量评估相对亲和力。
- 应用价值：KD≤10^-8 M为高亲和力抗体标准。
效价与浓度测定
- 方法：蛋白A/G层析定量（UV280吸光度）、BCA/Bradford法（总蛋白含量）、ELISA（功能性效价）。
- 数据解读：区分总蛋白浓度与活性抗体比例。
纯度与稳定性分析
- 检测内容：聚体、碎片及杂质残留。
- 方法：
  - SDS-PAGE/CGE（毛细管凝胶电泳）：检测纯度（≥95%）。
  - SEC-HPLC（分子排阻色谱）：分析单体/聚体比例。
  - 加速稳定性实验：4℃、室温、冻融循环下的抗体活性保持率。
功能性验证
- 体外实验：中和实验（如阻断病毒感染）、流式细胞术（细胞表面标记检测）、pull-down/Co-IP（蛋白互作验证）。
- 体内实验（可选）：动物模型药效评价。
批间一致性检测
- 方法：多批次抗体的结合活性（ELISA）、亲和力（SPR）、纯度（HPLC）比对。
- 标准：关键参数CV值（变异系数）≤15%。