表儿茶素（EC）检测方法综述
一、 样品前处理 无论采用何种分析方法，高效、完整的前处理是准确测定EC的基础：
- 提取：
- 溶剂选择： 常用甲醇、乙醇、丙酮或其与水的混合溶剂（如70%甲醇/乙醇水溶液）。酸性溶剂（如含1% HCl或甲酸）有时用于提高提取效率及稳定性。
- 方法： 超声辅助提取（高效、省时）、热回流提取、索氏提取、振荡提取等。优化提取温度、时间和溶剂比例是关键。
- 净化与富集：
- 液-液萃取： 可选步骤，用于去除部分脂溶性杂质。
- 固相萃取： 常用方法。选择适合的吸附剂（如C18柱、苯基柱、聚酰胺柱）可有效去除样品基质中的糖类、有机酸、色素等干扰物，同时富集目标EC。
- 过滤： 最终提取液需经0.22 μm或0.45 μm微孔滤膜过滤，去除细小颗粒，防止堵塞分析设备。
二、 主要检测方法
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高效液相色谱法（HPLC）与超高效液相色谱法（UPLC）
- 原理： 利用EC在固定相（色谱柱）和流动相之间分配系数的差异进行分离，是目前应用最广泛、技术最成熟的方法。
- 色谱条件：
- 色谱柱： 反相C18色谱柱（柱长150-250 mm，内径4.6 mm，粒径3-5 μm）是主流选择。UPLC使用更小粒径（<2 μm）的短柱，显著提高分离速度和分辨率。
- 流动相： 通常采用二元体系：水相（常含0.1%-1%的甲酸、乙酸或磷酸以抑制酚羟基电离，改善峰形）与有机相（乙腈或甲醇）。采用梯度洗脱程序优化复杂样品中EC与其他多酚的分离效果。
- 检测器：
- 紫外/二极管阵列检测器： 最常用。EC在~230 nm和~280 nm附近有特征紫外吸收峰（最大吸收约在280 nm）。DAD可提供吸收光谱，辅助峰纯度鉴定。
- 荧光检测器： EC本身具有弱荧光（激发~230 nm，发射~310 nm），但其灵敏度通常不如紫外法。有时用于特定方法开发。
- 优点： 分离能力强、重现性好、定量准确、适用范围广（各类基质）。
- 缺点： 运行成本相对较高，对复杂基质分离有时需优化条件。
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液相色谱-质谱联用法（LC-MS / LC-MS/MS）
- 原理： HPLC/UPLC高效分离后，质谱提供高选择性和高灵敏度的检测与鉴定。
- 关键参数：
- 离子源： 电喷雾离子化（ESI）最常用，负离子模式下检测EC的脱质子离子[M-H]⁻（m/z 289）。
- 质量分析器：
- 单四极杆质谱： 选择离子监测模式（SIM）可提高灵敏度。
- 三重四极杆质谱： 多反应监测模式（MRM）提供极高的选择性和灵敏度（m/z 289 → 245, 203等特征子离子），是痕量分析（如生物体液、药理研究）的金标准。
- 优点： 超高灵敏度和特异性，强大的结构确证能力，特别适用于代谢研究、复杂生物基质和痕量检测。
- 缺点： 仪器昂贵，操作维护复杂，运行成本高。
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光谱法
- 原理： 利用EC本身的显色反应或紫外/荧光特性进行测定。
- 常用方法：
- 香草醛-盐酸法： EC在强酸条件下与香草醛反应生成有色复合物（通常在500nm附近有最大吸收）。操作相对简单，成本低，适用于总儿茶素或特定类型儿茶素的批量筛选。
- 铁离子还原/络合法： 利用EC的还原性（如普鲁士蓝法-Folin-Ciocalteu的替代）或与Fe³⁺形成络合物显色进行比色测定。
- 直接紫外/荧光分光光度法： 测量样品在特征波长（如280nm）的吸光度或荧光强度。方法简便快速，但特异性差，易受共存多酚干扰，适用于纯度较高的样品或快速估算。
- 优点： 操作简便、快速、成本低廉（尤其比色法）。
- 缺点： 特异性低（易受结构类似物干扰），准确性相对色谱法较差，主要用于总多酚或特定类别酚类的粗略测定或快速筛查。
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电化学分析法
- 原理： 利用EC分子中酚羟基易被氧化的电化学活性进行检测。
- 常用技术：
- 循环伏安法： 研究EC的电化学行为（氧化峰电位、峰电流）。
- 差分脉冲伏安法/方波伏安法： 灵敏度更高，常用于定量分析。
- 安培检测器（与HPLC联用）： 作为HPLC的检测器，提供高灵敏度（有时优于紫外）和选择性（针对电活性物质）。
- 传感器： 基于玻碳电极、碳糊电极或经纳米材料（碳纳米管、石墨烯、金属纳米粒子）或分子印迹聚合物修饰的电极开发的EC电化学传感器，追求便携、快速检测。
- 优点： 灵敏度高（尤其修饰电极），设备相对简单（除联用外），有潜力用于便携式设备开发。
- 缺点： 电极易污染、重现性有时受电极状态影响较大，选择性仍需优化（其他酚类也有响应），在复杂基质中的应用经验相对少于色谱法。
三、 方法选择与比较
四、 分析与展望
表儿茶素（EC）的检测技术已发展得相当成熟。HPLC/UPLC-UV/DAD凭借其优异的分离能力、稳定性和可接受的成本，成为绝大多数实验室日常定量分析的首选方法。对于要求超痕量检测或需明确结构确证的应用（如生物样品分析、代谢研究），LC-MS/MS代表了当前最高的技术水准，尽管其成本高昂。简便快速的光谱法在特定场景下仍有实用价值，尤其在资源有限的场合或作为初步筛选工具。电化学分析法，特别是结合了纳米材料和分子识别技术的传感器，在快速、现场检测领域展现了诱人的前景，是当前研究的热点之一。
未来EC检测技术的发展趋势将聚焦于：进一步提高方法的灵敏度（尤其对复杂基质中低含量目标物）、特异性与抗干扰能力；开发更高效、绿色、自动化的样品前处理方法；推动便携化、微型化、集成化设备的研发，以满足现场快速检测的需求；探索新型识别元件（如适配体、仿生材料）在传感器中的应用。这些进步将更精准、高效、便捷地服务于EC相关的科学研究、产品开发和品质监控领域。
参考文献（示例格式）:
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- Robbins, R. J. (2003). Phenolic acids in foods: An overview of analytical methodology. Journal of Agricultural and Food Chemistry.
- Ignat, I., Volf, I., & Popa, V. I. (2011). A critical review of methods for characterisation of polyphenolic compounds in fruits and vegetables. Food Chemistry.
- Bravo, L. (1998). Polyphenols: chemistry, dietary sources, metabolism, and nutritional significance. Nutrition Reviews.
- Zhang, H., & Wang, Z. Y. (2016). Electrochemical sensors for detection of natural antioxidants. Sensors and Actuators B: Chemical.