急性经口毒性试验(大鼠)技术规程
1. 试验目的 本试验旨在测定受试物（通常为化学品、药物或天然产物）经单次口服途径给予健康成年大鼠后，在短时间内（通常为14天）所产生的毒性效应，特别是致死效应，并估算其中位致死剂量（LD50）或对受试物进行急性毒性危害分类。
2. 试验原理 通过给予一组大鼠不同剂量的受试物，观察其产生的急性毒性反应、死亡情况以及大体病理学变化，评估受试物对生物体的急性毒性强度。试验结果用于评估受试物在意外或故意经口摄入时的潜在危害，为安全评价、风险分级及制定安全操作规范提供科学依据。
3. 试验材料
- 实验动物： 健康、初成年（通常6-8周龄）的SPF级大鼠（常用品系如SD或Wistar）。雌雄通常分别进行试验，或根据研究目的选择单一性别（需说明理由）。试验前动物需在标准化实验动物房适应环境至少5天。
- 受试物： 已知化学特性的待测物质。
- 溶剂/赋形剂： 根据受试物理化性质选择，常用水、生理盐水、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液、玉米油、吐温-80等。应尽可能选用毒性低或无毒的溶剂，首选水。需设置溶剂对照组。
- 设备： 动物电子秤、灌胃针（钝头，适合大鼠规格）、一次性注射器、移液器、防护装备（手套、实验服、护目镜、口罩）、动物笼具、观察记录表、病理解剖器械（剪刀、镊子等）、组织固定液（如10%中性福尔马林）、生物安全柜/通风橱、冰箱等。
4. 试验方法
- 4.1 动物准备与分组：
- 试验前禁食（通常16-18小时，自由饮水）。
- 按体重随机分组（通常每组至少5只动物，雌雄分设）。
- 设置至少3个剂量组（通常按几何级数递增）和一个溶剂对照组。剂量范围应基于预试验或文献资料，旨在覆盖预期出现毒性效应（包括部分动物死亡）的剂量范围。
- 称重并记录初始体重。
- 4.2 受试物配制与给药：
- 根据受试物溶解性，用选定溶剂配制成所需浓度的均匀溶液、混悬液或乳液。无法溶解的固体可配成稳定混悬液或直接灌胃粉末（需特殊技术）。
- 给药体积通常控制在10 mL/kg体重或更低（常用5-10 mL/kg），以减少体积效应。
- 给药方式：使用合适的钝头灌胃针经口腔插入食道进行一次性灌胃给药。给药后观察动物是否出现呛咳等异常。
- 对照组给予等体积溶剂。
- 记录给药时间、实际给药剂量（mg/kg或g/kg体重）、给药体积和浓度。
- 4.3 观察期与检查：
- 给药后即刻及第1天： 频繁观察（如给药后0.5、1、2、4、6小时），之后至少每天观察两次（上下午各一次），持续至少14天。
- 观察指标：
- 一般状态： 毛发、姿势、活动度、行为（如兴奋、抑制、攻击性、刻板行为）。
- 神经系统： 震颤、抽搐（阵挛性或强直性）、共济失调、麻痹、昏睡、昏迷、痛觉反应、瞳孔变化。
- 自主神经系统： 流泪、流涎、竖毛、瞳孔大小（缩小/散大）、腹泻、便秘。
- 呼吸系统： 呼吸频率（加快/减慢）、呼吸困难（张口呼吸、紫绀）。
- 循环系统： 粘膜颜色（苍白、紫绀）。
- 死亡情况： 记录死亡时间、濒死状态（需及时安乐死以减少痛苦）。
- 体重变化： 给药前、给药后第1、3、7、14天称重并记录。
- 摄食与饮水： 每日记录（尤其前3天）。
- 4.4 病理学检查：
- 所有试验期间死亡或濒死处死的动物，以及试验结束时存活的动物均需进行大体解剖检查。
- 重点观察口腔、食道、胃肠道（内容物、粘膜损伤、出血、穿孔、溃疡）、肝、肾、脾、心、肺、脑、生殖腺等主要器官有无肉眼可见的病理变化（如充血、出血、水肿、坏死、颜色异常、肿大或萎缩）。
- 对肉眼可见病变或关键靶器官（如肝、肾、胃肠道）应取材保存于10%中性福尔马林中，必要时进行组织病理学检查。
5. 数据处理与分析
- 详细记录所有观察结果（包括症状、出现时间、持续时间、严重程度）和死亡情况。
- 计算各组动物的死亡率。
- LD50估算： 采用统计学方法（如改良寇氏法、Bliss法、概率单位法等）计算LD50值及其95%置信区间。现代趋势更倾向于使用固定剂量法或上下法进行危害分类而非精确LD50值。
- 描述中毒症状的特征、出现时间、持续时间、恢复情况及其与剂量的关系。
- 分析体重变化、摄食饮水变化等数据。
- 总结大体病理学检查结果。
6. 结果报告 报告应包括但不限于以下内容：
- 试验目的与依据。
- 受试物与溶剂信息（化学名称、理化特性、纯度、批号、配制方法）。
- 动物信息（品系、来源、性别、体重范围、数量、饲养条件、适应期）。
- 试验设计（分组方法、剂量选择依据、给药途径、体积、时间）。
- 详细的观察方法和频率。
- 所有原始观察数据（症状、死亡、体重、摄食饮水）。
- 病理学检查结果（文字描述，附代表性照片）。
- LD50值及置信区间（如计算）或根据观察结果进行危害分类（如按GHS标准）。
- 中毒症状的详细描述与分析。
- 试验结论：对受试物急性经口毒性的评价（毒性强度分级、主要靶器官、中毒特征等）。
7. 试验管理与伦理
- 试验必须在经认证的实验动物设施内，由具备资质的人员严格按照标准操作规程（SOP）进行。
- 严格遵守实验动物福利伦理原则（如“3R”原则：替代、减少、优化）。所有操作应尽量减少动物的痛苦和不适。对出现严重痛苦或濒死的动物应及时进行人道终点评估并安乐死。
- 试验方案需经机构动物伦理委员会（IACUC）审查批准后方可实施。
- 操作人员需接受充分培训，并采取必要的个人防护措施（PPE）。
8. 注意事项
- 受试物应标识清楚，妥善保管。
- 灌胃操作需熟练轻柔，避免损伤食道或误入气管。
- 观察需细致、客观、及时记录，避免主观臆断。
- 对高毒性或未知毒性物质，需在通风橱或生物安全柜内操作，并制定应急处理预案。
- 试验废弃物（动物尸体、组织、受试物残液等）需按生物危害废弃物处理规范进行处置。
本规程提供了急性经口毒性试验（大鼠）的基本框架和技术要点，具体实施时需根据受试物特性和研究目的制定详细的试验方案。