甘油脂类（如TG、DG等）检测 - 中析研究所生物检测中心

甘油脂类检测：从基础到临床应用

一、甘油脂类简介

甘油脂类（Glycerolipids）是一类重要的脂质分子，其结构核心是甘油（丙三醇）骨架。根据与甘油羟基结合的脂肪酸链数目和类型，主要分为：

甘油三酯（Triglycerides, TG）：甘油分子的三个羟基均与脂肪酸酯化形成酯键。TG是人体内主要的能量储存形式，主要存在于脂肪组织，也循环于血液中（称为“血甘油三酯”）。它们是乳糜微粒（CM）和极低密度脂蛋白（VLDL）的主要脂质成分。
甘油二酯（Diglycerides, DG）：甘油分子的两个羟基与脂肪酸酯化。DG在体内含量相对TG少得多，但它们是TG合成和分解代谢的重要中间产物，也作为重要的信号分子参与细胞过程（如胰岛素信号通路、细胞增殖）。
甘油一酯（Monoglycerides, MG）：甘油分子的一个羟基与脂肪酸酯化。MG是膳食脂肪消化吸收过程中的关键中间产物，也是TG水解的产物之一。

二、甘油脂类检测的目的与意义

检测血液中（主要是血清或血浆）的甘油脂类，特别是甘油三酯（TG），具有重要的临床价值：

心血管疾病风险评估： 高甘油三酯血症是动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）的独立危险因素。它常与低高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、小而密的低密度脂蛋白（sdLDL）增多、胰岛素抵抗等伴随出现（即“致动脉粥样硬化性血脂异常”），共同增加心血管风险。TG水平是计算低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的关键参数（常用Friedewald公式）。
代谢综合征诊断： 空腹甘油三酯升高（≥ 1.7 mmol/L 或 ≥ 150 mg/dL）是诊断代谢综合征的核心标准之一。
胰腺炎风险评估与诊断： 严重的高甘油三酯血症（通常 > 11.3 mmol/L 或 > 1000 mg/dL）是诱发急性胰腺炎的重要危险因素。监测TG水平对胰腺炎患者的病因诊断和管理至关重要。
脂代谢异常疾病的诊断与监测： 如家族性高甘油三酯血症、家族性乳糜微粒血症综合征等遗传性疾病的诊断、严重程度的评估以及治疗效果监测。
其他疾病状态评估： 肾病综合征、未控制的糖尿病、甲状腺功能减退、某些肝脏疾病（如脂肪肝）、酗酒等均可引起继发性高甘油三酯血症，TG检测有助于评估这些疾病状态。
饮食与生活方式干预效果评估： 监测TG水平变化是评估饮食控制（如低脂、低碳水化合物饮食）、运动、减重等干预措施有效性的重要指标。

DG和MG在常规临床检测中应用较少，主要用于特定科研或某些特殊代谢疾病的研究。

三、主要检测方法

酶法（临床常规方法）：
- 原理： 这是目前临床实验室检测血清/血浆TG的金标准方法。其核心是使用特异性酶逐步分解TG并产生可测量的产物（通常是过氧化氢或NADH），通过比色法或荧光法进行定量。
  - 第一步：水解： 脂蛋白脂肪酶（LPL）或特异性脂肪酶将TG水解为甘油和游离脂肪酸。
  - 第二步：甘油磷酸化： 甘油在甘油激酶（GK）作用下，消耗ATP生成甘油-3-磷酸。
  - 第三步：甘油-3-磷酸氧化： 甘油磷酸氧化酶（GPO）催化甘油-3-磷酸氧化，生成过氧化氢（H₂O₂）和二羟丙酮磷酸。
  - 第四步：显色反应： 过氧化物酶（POD）催化H₂O₂与特定的色原底物（如4-氨基安替比林和酚或TOOS）反应，生成有色的醌亚胺化合物（通常在500-550 nm有最大吸收峰）。颜色的深浅与样本中TG的浓度成正比。
- 特点： 特异性好（主要针对TG）、灵敏度高、操作简便、自动化程度高、成本相对较低。DG和MG在此体系中不反应或反应极弱，因此测得的实际是“总甘油”减去游离甘油后的浓度（通常报告为TG）。
- 注意事项： 需要去除游离甘油的干扰：部分试剂盒包含一步“游离甘油空白”测定，即不加脂肪酶/LPL水解TG，只测游离甘油浓度，然后用总甘油结果减去该值得到真正的TG浓度。现代自动化生化分析仪常采用双试剂法，第一试剂含GK、GPO、POD和色原，用于消耗游离甘油；第二试剂含脂肪酶/LPL，启动TG水解和后续反应。
其他方法（主要用于科研或特殊需求）：
- 气相色谱法（GC）或气相色谱-质谱联用法（GC-MS）： 将脂质提取、衍生化后，通过GC分离，可同时定量TG、DG、MG等不同种类的甘油脂分子及其脂肪酸组成。精度高，但操作复杂、耗时长。
- 高效液相色谱法（HPLC）或液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）： 可以直接分离和定量不同种类的甘油脂分子（TG, DG, MG），具有高灵敏度和高特异性，是脂质组学研究的主要工具。成本较高，对操作人员要求高。
- 干化学法： 用于即时检验（POCT）设备或便携式分析仪。将试剂集成在试纸条或反应膜上，样本加入后发生酶促反应并产生颜色变化，通过反射光度法检测。方便快捷，但精密度和准确性通常略低于实验室酶法。
- 化学法（已淘汰）： 如乙酰丙酮法，操作繁琐，特异性差，易受干扰，已被酶法取代。

四、样本要求与处理

样本类型： 血清（推荐）或肝素/EDTA抗凝的血浆。避免使用柠檬酸盐、草酸盐、氟化物抗凝剂，它们可能干扰酶反应或影响脂肪酶活性。
采血前准备：
- 空腹要求： 常规TG检测要求空腹（禁食除水外至少8-14小时）。餐后TG会显著升高（餐后高脂血症），非空腹结果主要用于心血管风险评估（非空腹TG也是风险标志），但诊断高甘油三酯血症、代谢综合征或计算LDL-C时仍需空腹血。采血前24小时避免饮酒和剧烈运动。
- 体位： 建议坐位休息5分钟后采血。
样本处理：
- 采血后尽快（最好在2小时内）分离血清/血浆。
- 避免溶血（溶血会干扰比色法测定）。
- 分离后的血清/血浆在4°C可稳定数天。如需长期保存，应置于-20°C或-70°C，避免反复冻融（特别是TG浓度高的样本易分层）。

五、结果解读与临床意义

单位： mmol/L 或 mg/dL (1 mmol/L ≈ 88.5 mg/dL)。
参考范围（成人，空腹）：
- 理想水平： < 1.7 mmol/L (< 150 mg/dL)
- 临界升高： 1.7 - 2.2 mmol/L (150 - 199 mg/dL)
- 升高： 2.3 - 5.6 mmol/L (200 - 499 mg/dL)
- 重度升高： ≥ 5.7 mmol/L (≥ 500 mg/dL) （显著增加胰腺炎风险）
- 注意：不同实验室可能略有差异，应以报告单上的参考范围为准。儿童、青少年的参考范围不同。
临床解读：
- 降低（低甘油三酯血症）： 较少见，可见于严重营养不良、吸收不良综合征、甲状腺功能亢进、某些遗传性疾病等。
- 升高（高甘油三酯血症）：
  - 原发性（遗传性）： 如家族性高甘油三酯血症、家族性混合型高脂血症、家族性异常β脂蛋白血症（Ⅲ型高脂蛋白血症）、家族性乳糜微粒血症综合征等。
  - 继发性：
    - 生活方式因素： 高脂、高糖（尤其果糖）、高热量饮食，肥胖（尤其是腹型肥胖），缺乏运动，酗酒，吸烟。
    - 代谢与内分泌疾病： 2型糖尿病及胰岛素抵抗，代谢综合征，甲状腺功能减退症，库欣综合征。
    - 肾脏疾病： 肾病综合征，慢性肾功能衰竭。
    - 肝脏疾病： 脂肪肝，胆汁淤积。
    - 药物： β受体阻滞剂，噻嗪类利尿剂，糖皮质激素，雌激素（口服高剂量），维A酸类，某些抗精神病药（如非典型抗精神病药），免疫抑制剂（如西罗莫司）。
    - 妊娠： 妊娠中晚期可出现生理性升高。
    - 急性应激： 如严重感染、烧伤、创伤等。
- 非空腹TG（作为心血管风险标志）： 近年来研究认为，非空腹TG水平（尤其餐后峰值）也与心血管风险相关。一些指南建议在常规血脂筛查时可考虑使用非空腹血，但结果解读需谨慎，明确标注采血状态。若非空腹TG > 2.0 mmol/L (>175 mg/dL)，建议后续检测空腹血脂。

六、检测质量保证

标准化： 采用国际公认的参考方法和参考物质进行校准，确保结果准确性和不同实验室间的可比性。
室内质量控制（IQC）： 实验室每日使用已知浓度的质控品进行检测，监控检测系统的精密度和准确度是否在控（如使用Westgard规则）。
室间质量评价（EQA）/能力验证（PT）： 定期参加由权威机构组织的EQA/PT活动，评估实验室检测结果与其他实验室或靶值的一致性。
干扰因素管理： 了解并尽量减少溶血、脂血（严重乳糜血可能导致假性升高或干扰光度测定）、黄疸等常见干扰因素的影响。对于严重脂血样本，可能需要超速离心等特殊处理后再测定。

七、总结

甘油三酯（TG）检测是临床血脂谱评估的核心项目之一，对于心血管疾病风险分层、代谢综合征诊断、胰腺炎风险评估以及多种代谢性疾病的诊疗管理具有不可替代的重要价值。酶法以其优越的性能成为临床常规检测的首选方法。规范的样本采集（特别是空腹要求）、处理、检测过程以及严格的质量控制是获得可靠结果的基础。正确解读TG结果需结合患者的临床状况、其他血脂指标（TC, HDL-C, LDL-C）、生活方式因素及可能存在的继发原因，为个体化的预防和治疗策略提供依据。而甘油二酯（DG）和甘油一酯（MG）的检测则更多服务于特定的科研需求和深入的脂质代谢研究领域。