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微生物限度与无菌检查：保障药品安全的关键技术体系
在药品质量控制领域，微生物限度检查与无菌检查是两项至关重要的安全性评价手段，共同构成保障药品免受微生物污染确保患者用药安全的核心防线。这两项技术基于明确的科学原理和严格的法规要求（主要依据《中国药典》通则），其应用范围方法学及判定标准均有显著差异。以下对其进行系统阐述：
一 微生物限度检查 (Microbial Limit Tests)
1. 概念与目的
微生物限度检查法系用于测定非无菌药品原料辅料及内包装材料受微生物污染的程度
13。其核心目标并非要求样品绝对无菌，而是将微生物数量控制在安全范围内，并确保不得检出特定致病菌（控制菌）。主要意义在于：- 评价生产卫生状况：反映生产储存运输过程中的卫生控制水平。
- 保障用药安全：防止因微生物过量繁殖或致病菌存在导致药品变质失效或引发患者感染。
2. 检查项目
- 需氧菌总数：需氧条件下生长的细菌总数（通常以TSA培养基计数）。
- 霉菌和酵母菌总数：真菌类微生物总数（通常以SDA培养基计数）。
- 控制菌检查：检测是否存在特定致病菌，如大肠埃希菌沙门菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌梭菌耐胆盐革兰阴性菌等，依据药品剂型与给药途径确定具体项目 1 7。
3. 核心方法
根据供试品特性（如是否含抑菌成分）选择适宜方法，需预先进行方法适用性试验以确认方法的有效性
12526：- 平皿法：供试液直接或稀释后接种至平板培养基，培养后计数菌落。适用于多数固体/液体制剂 1 3。
- 薄膜过滤法：供试液通过孔径≤0.45μm的滤膜过滤，微生物被截留，滤膜贴于培养基培养。适用于含抑菌成分油剂或溶解度差的样品 1 7。
- MPN法（最可能数法）：适用于微生物浓度极低且预计分布不均的样品（如部分原料） 7。
4. 限度标准制定
标准依据药品的给药途径原料来源生产工艺及患者风险综合制定
725：说明：表中数值为最大可接受限度（如10³表示≤2000 cfu/g或ml）
7。
5. 关键质控点
- 方法适用性试验：证明方法能有效消除供试品抑菌性并准确回收微生物（需使用5株标准菌株验证） 1 26。
- 培养基质量控制：需进行无菌性检查及促生长能力试验 3 25。
- 环境控制：操作应在不低于D级背景下的生物安全柜或B级洁净区进行 2 18。
二 无菌检查 (Sterility Test)
1. 概念与目的
用于判定规定必须无菌的药品/器械（如注射液植入器械手术用品）是否达到无菌要求
1718。其是强制性放行标准，不合格产品禁止上市。2. 适用范围
- 制剂通则要求无菌的品种（注射剂眼内注射液植入剂冲洗剂等）。
- 标示“无菌”的医疗器械或生物制品。
- 用于手术严重烧伤或创伤的局部给药制剂 7 18。
3. 核心方法
必须在无菌条件下操作，环境要求为：
- B级背景下的A级单向流区域（如超净工作台/隔离器） 2 18。
- 定期监测悬浮粒子浮游菌沉降菌（按GMP洁净标准ABCD级） 2。
检查方法包括：
- 薄膜过滤法（首选）： 供试品溶液过滤后，滤膜分割接种至2种培养基：
- 硫乙醇酸盐流体培养基（培养需氧/厌氧细菌，30–35°C）。
- 胰酪大豆胨液体培养基（培养霉菌/酵母菌，20–25°C） 1 7 18。
- 直接接种法： 直接取规定量样品加入上述培养基。适用于无法过滤的粘稠液固体或医疗器械 1 18。
关键点：需同步进行方法适用性试验与培养基促生长试验
118。
4. 结果判定
注：若阳性对照未生长，试验无效
17。
三 微生物限度与无菌检查的核心区别
四 常见挑战与质量控制
-
抑菌性干扰：
- 微生物限度：方法适用性试验中需通过中和剂稀释或薄膜过滤消除抑菌性 1 25。
- 无菌检查：采用充分冲洗（薄膜过滤法）或增加培养基体积（直接接种法） 18。
-
实验室污染防控：
- 无菌室需定期监测（沉降菌≤1cfu/皿/30min in A级）。
- 人员需经微生物学培训，规范无菌操作（穿戴灭菌服手套） 2 18。
-
生物负载影响：
- 高生物负载样品需预处理（如离心过滤）或选择低稀释级计数 25。
-
方法转移与验证：
- 方法变更或实验室转移时需重新验证/确认 26。
五 总结
微生物限度检查与无菌检查是药品微生物质量控制的两大基石：
- 微生物限度关注“可控污染”，服务于非无菌产品的安全性；
- 无菌检查确保“绝对无菌”，是高风险制剂的生命线。 二者均需严格遵循《中国药典》方法学要求，重视方法适用性验证环境控制及人员培训 1 2 7。随着微生物分析技术（如快速微生物检测）的发展，未来检测效率与准确性将进一步提升，但基于培养法的核心原则仍将在保障药品安全中发挥不可替代的作用。
参考文献来源： 《中国药典》通则（1101无菌检查法1105微生物计数法1106控制菌检查法1107非无菌药品微生物限度标准）
137；药品微生物实验室质量管理指导原则2；医疗器械无菌检验指南18；微生物检查操作规范。