CAMP试验:快速识别B群链球菌的经典协同溶血试验
定义与核心目的 CAMP试验(Christie–Atkins–Munch-Petersen试验)是一种基于协同溶血现象的经典微生物学检测方法,其主要目的是特异性鉴定B群链球菌(无乳链球菌,Streptococcus agalactiae)。该试验以其发现者的姓氏首字母命名。
核心原理:协同溶血机制
- 金黄色葡萄球菌的“助攻”: 某些金黄色葡萄球菌菌株能分泌一种名为“CAMP因子”的蛋白质(具有磷脂酶活性)。
- B群链球菌的响应: B群链球菌能产生一种可被CAMP因子激活的胞外蛋白。
- 协同破坏红细胞: 当上述两种细菌在血平板上靠近生长时,CAMP因子激活B群链球菌的蛋白,两者协同作用,显著增强对红细胞的溶解破坏能力(β溶血),在两种细菌生长线的交界处形成特征性的箭头状或半月形强化溶血区。
- 其他链球菌的表现: 绝大多数其他链球菌(如A群、D群)不具备这种协同能力,在金黄色葡萄球菌线旁不会出现强化溶血区。
标准操作流程
- 制备平板: 使用5%-10%脱纤维绵羊血或马血倾注血琼脂平板(马血效果更佳)。
- 划线接种: 用标准金黄色葡萄球菌(如ATCC 25923)在平板中央划一条直线。
- 垂直划线: 将待测的β溶血性链球菌(从血平板上纯化)垂直于金黄色葡萄球菌线划线接种,两线间距约1cm,但不相交。同时设置已知的B群链球菌阳性对照和阴性对照(如A群链球菌)。
- 培养条件: 平板置于35-37°C,5%-10% CO₂环境(烛缸或CO₂培养箱)中培养18-24小时。
- 结果判读: 观察金黄色葡萄球菌线与待测菌线交界处附近的溶血现象。
结果判读标准
- 阳性结果: 在金黄色葡萄球菌线与待测菌线交界处,出现清晰、指向待测菌的箭头状或半月形加强溶血区(明显大于待测菌自身的β溶血区)。表明待检菌为B群链球菌。
- 阴性结果: 待测菌线在靠近金黄色葡萄球菌线处无增强的溶血区,仅保持其自身的β溶血状态(若有)。表明待检菌非B群链球菌。
- 对照: 阳性对照应出现典型箭头状溶血,阴性对照应无此现象。对照结果符合预期,试验方有效。
核心临床与应用价值
- 快速筛查B群链球菌: 是临床微生物实验室鉴定B群链球菌的关键、简便、经济的初筛试验。
- 围产期感染防控: B群链球菌是新生儿败血症和脑膜炎的主要病原体之一。对孕晚期(35-37周)孕妇进行生殖道/直肠标本的B群链球菌筛查(常包含CAMP试验)至关重要,阳性结果需产时预防性使用抗生素,显著降低新生儿早发型感染风险。
- 区分链球菌群别: 在链球菌的初步分群鉴定中(尤其β溶血链球菌),CAMP试验阳性是支持B群鉴定的强有力证据。
- 其他感染诊断: 辅助诊断由B群链球菌引起的成人菌血症、尿路感染、皮肤软组织感染等。
优势与局限性
- 优势:
- 操作简单,成本低廉,结果直观。
- 特异性高:阳性结果强烈提示B群链球菌。
- 快速:18-24小时可出结果。
- 局限性:
- 敏感性非100%:极少数B群链球菌株可能呈弱阳性或阴性。
- 依赖β溶血性:仅适用于产生β溶血的链球菌(绝大多数临床分离的B群链球菌符合)。
- 需要特定指示菌:必须使用能产生足够CAMP因子的金黄色葡萄球菌菌株。
- 非自动化:需人工判读结果。
- 不能区分亚型或耐药性。
与其他方法的关系 虽然分子检测(如PCR)和乳胶凝集试验在速度或自动化方面有优势,但CAMP试验因其成本效益高、操作简便、结果可靠,在资源有限或作为初筛方法时仍被广泛使用,常与其他生化试验(如胆汁七叶苷、PYR试验)组合用于链球菌的最终鉴定。
临床应用实例 一位孕36周的孕妇进行常规GBS筛查。实验室将其阴道拭子标本接种于血平板,分离出β溶血性链球菌。进行CAMP试验:将该菌株划线垂直于标准金黄色葡萄球菌线。培养24小时后,两线交界处出现明显箭头状溶血区(阳性)。结合其他特征,确认为B群链球菌。产科医生据此在孕妇分娩时给予抗生素预防,有效保护了新生儿健康。
总结 CAMP试验利用B群链球菌与金黄色葡萄球菌CAMP因子独特的协同溶血效应,通过观察血平板上产生的特征性箭头状溶血区,实现对B群链球菌的特异性鉴定。这一历经时间考验的经典试验,以其经济性、简便性和可靠性,在临床微生物学实验室,尤其是围产期B群链球菌筛查和感染诊断中,持续发挥着不可替代的重要作用。它是保障新生儿健康、预防严重感染的一道关键防线。
注意: 所有操作需遵循标准微生物实验室生物安全规范。