清咽润喉（动物功能评价实验）

发布时间：2025-06-19 08:01:15 阅读量：2 作者：生物检测中心

清咽润喉功能动物实验评价报告

摘要： 本研究通过建立大鼠咽部黏膜刺激模型，系统评价某清咽润喉供试品对动物咽部黏膜损伤的保护作用及抗炎效果。实验结果表明，该供试品能显著减轻模型动物咽部黏膜病理损伤，降低血清炎症因子水平，缓解吞咽疼痛行为，验证了其清咽润喉的功能特性。本研究为评价清咽润喉类产品的功能效应提供了规范的实验依据。

关键词： 清咽润喉；动物实验；咽部黏膜刺激模型；病理组织学；炎症因子；功能评价

1. 实验目的

依据保健食品功能评价指导原则及相关药理学研究规范，建立可靠的动物模型，客观评价供试品清咽、缓解咽部不适及保护咽部黏膜的功效。

2. 材料与方法

2.1 实验动物

健康成年SPF级SD大鼠60只，雄性，体重180-220g。实验动物许可证号：SYXK(京)2023-XXXX。动物饲养于恒温(22±2℃)、恒湿(50±10%)、12小时光暗循环环境中，自由摄食饮水。实验操作遵循实验动物福利伦理审查委员会批准（批准号：IACUC-2023-XXX）。

2.2 供试品

  • 来源： 市购符合国家标准的某清咽润喉方原料。
  • 制备： 按传统水煎法制备浓缩液（生药含量：1g/mL），4℃冷藏备用。临用前以纯净水稀释至所需浓度（设高、中、低剂量组）。

2.3 主要试剂与仪器

  • 氨水溶液（分析纯）
  • 无水乙醇
  • 甲醛溶液（10%中性缓冲福尔马林）
  • ELISA试剂盒（TNF-α, IL-1β, IL-6）
  • 苏木素-伊红（H&E）染色试剂
  • 石蜡包埋机、切片机、光学显微镜
  • 酶标仪
  • 电子天平、灌胃针具等。

2.4 动物模型建立与分组

  • 模型建立（氨水刺激法）： 适应性饲养一周后，除空白对照组（NC）外，其余大鼠参照文献方法建立咽部黏膜刺激模型。具体：大鼠轻度麻醉（乙醚吸入），使用微量注射器将0.5%氨水溶液50μL均匀涂抹于咽后壁黏膜表面，每日1次，连续7天。
  • 分组与给药（n=10/组）：
    • NC组（空白对照）： 正常饲养，咽部涂抹等量生理盐水，灌胃生理盐水。
    • MC组（模型对照）： 建立咽部刺激模型，灌胃生理盐水。
    • PC组（阳性对照）： 建立咽部刺激模型，灌胃某已上市知名咽喉含片溶液（按人用等效剂量换算）。
    • 供试品低剂量组（LD）： 建立咽部刺激模型，灌胃供试品溶液（0.5g生药/kg体重/天）。
    • 供试品中剂量组（MD）： 建立咽部刺激模型，灌胃供试品溶液（1.0g生药/kg体重/天）。
    • 供试品高剂量组（HD）： 建立咽部刺激模型，灌胃供试品溶液（2.0g生药/kg体重/天）。
  • 给药方式与周期： 造模同时开始灌胃给药，每日1次，连续14天。给药体积按10mL/kg体重计算。

2.5 观察指标与检测方法

  • 一般状态观察： 每日观察记录大鼠精神状态、毛发、活动、摄食饮水及体重变化。
  • 吞咽行为学观察： 末次给药后1小时，观察记录大鼠在5分钟内连续吞咽动作次数（反映咽部不适感）。
  • 血清炎症因子检测： 末次给药后2小时，腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，3000rpm离心15min分离血清。采用ELISA法严格按照试剂盒说明书检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平。
  • 咽部黏膜组织病理学检查： 取血后迅速剥离咽后壁黏膜组织（约1cm x 0.5cm），10%中性福尔马林固定24小时以上，常规石蜡包埋、切片（厚度5μm）、H&E染色。光镜下（200倍、400倍）由两名病理医师双盲法观察并评分：
    • 黏膜上皮完整性（0-3分：完整-严重缺损/溃疡）
    • 黏膜下层炎症细胞浸润程度（0-3分：无-重度浸润）
    • 毛细血管充血/扩张程度（0-3分：正常-重度）
    • 腺体状况（0-3分：正常-显著增生/萎缩）
    • 总分：0-12分。

2.6 统计分析

数据以Mean ± SD表示。采用SPSS 26.0软件进行统计分析。组间比较若方差齐性采用单因素方差分析（One-way ANOVA）及LSD或Dunnett's T3法进行多重比较；若方差不齐则采用非参数检验（Kruskal-Wallis H检验）。以 P < 0.05 为差异有统计学意义。

3. 实验结果

3.1 一般状态与体重

NC组大鼠状态良好，活动、摄食饮水正常。MC组大鼠在造模后第3天起出现精神稍萎靡、被毛欠光泽、喜蜷缩、摄食量减少、体重增长缓慢（与NC组相比，P<0.01）。各给药组（PC、LD、MD、HD）大鼠精神状态、活动度及摄食量均优于MC组，体重增长趋势接近NC组（MD、HD组体重与MC组比，P<0.05）。

3.2 吞咽行为学

MC组大鼠5分钟内连续吞咽次数（32.6 ± 5.8次）显著高于NC组（10.2 ± 2.1次， P<0.01），表明模型成功诱导咽部不适感。PC组（18.5 ± 4.3次）、MD组（20.7 ± 4.0次）、HD组（17.9 ± 3.7次）吞咽次数均显著低于MC组（P<0.01），且HD组效果与PC组相当（P>0.05）。LD组（26.8 ± 5.2次）亦低于MC组（P<0.05），但效果弱于中高剂量组。

3.3 血清炎症因子水平

MC组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著高于NC组（P<0.01）。各给药组均能不同程度降低炎症因子水平：

  • TNF-α: HD组、MD组、PC组与MC组相比显著降低（P<0.01），LD组亦有降低趋势（P=0.056）。
  • IL-1β: HD组、MD组、PC组显著低于MC组（P<0.01），LD组显著低于MC组（P<0.05）。
  • IL-6: HD组、MD组、PC组显著低于MC组（P<0.01），LD组显著低于MC组（P<0.05）。 HD组在降低TNF-α和IL-6水平上效果略优于PC组（P<0.05）。

3.4 咽部黏膜组织病理学

  • NC组： 黏膜上皮完整，鳞状上皮层次清晰，表面角化正常。黏膜下层结构疏松，偶见少量淋巴细胞，血管形态良好，腺体排列规则（总分：1.2 ± 0.4）。
  • MC组： 黏膜上皮大片脱落、缺损，甚至形成浅溃疡灶。黏膜下层可见大量中性粒细胞、淋巴细胞弥漫浸润，血管高度充血扩张，腺体结构紊乱，部分导管扩张、分泌亢进（总分：9.8 ± 1.1，显著高于NC组，P<0.01）。
  • 给药组：
    • LD组： 上皮部分区域修复，但仍有缺损。炎症浸润减轻（以淋巴细胞为主），血管扩张充血改善，腺体结构有所恢复（总分：6.5 ± 1.0，显著低于MC组，P<0.01）。
    • MD组： 上皮基本完整，局部轻度角化不全。炎症浸润显著减轻（少量散在淋巴细胞），血管充血扩张明显减轻，腺体结构接近正常（总分：3.8 ± 0.8，显著低于MC组及LD组，P<0.01）。
    • HD组 & PC组： 结构接近NC组。上皮完整连续，层次清晰。黏膜下层仅偶见极少量淋巴细胞，血管形态正常，腺体排列规则，分泌状态正常（HD总分：2.0 ± 0.6； PC总分：2.3 ± 0.7；均显著低于MC组及LD组，P<0.01；与NC组无显著差异）。

4. 讨论

实验结果表明，供试品（清咽润喉方）能剂量依赖性地缓解模型动物的咽部不适（显著减少吞咽动作次数），减轻咽部黏膜的病理损伤程度（显著降低组织病理学评分），并有效抑制全身系统性炎症反应（显著降低血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平）。其作用机制可能与其减轻咽部局部炎症浸润、保护黏膜上皮屏障完整性、抑制促炎因子释放有关。中剂量（MD）和高剂量（HD）供试品效果显著，高剂量组（HD）在改善黏膜病理损伤和控制炎症方面效果尤为突出，部分指标（血清TNF-α、IL-6）甚至显著优于阳性对照组（PC），显示出良好的清咽润喉功能潜力。

5. 结论

在本实验设定的条件下，通过规范的动物模型评价，该清咽润喉供试品（此处明确为受试物，如“该受试物”或“供试品”）：

  1. 具有明确的清咽作用： 能显著减轻氨水诱导的大鼠咽部黏膜急性炎症和病理损伤，保护黏膜结构完整性（病理学评分显著降低）。
  2. 具有明确的润喉（缓解咽部不适）作用： 能显著减少模型动物因咽部刺激引发的疼痛性连续吞咽动作次数。
  3. 作用机制与抑制炎症相关： 能有效降低模型动物血清中关键促炎因子（TNF-α, IL-1β, IL-6）的水平。

综上，该供试品在本次动物功能评价实验中，展现了良好的清咽润喉作用。推荐其（高、中剂量）可为进一步研究或应用提供实验依据。

参考文献： (此处列举关键参考文献格式示例)

  1. 保健食品检验与评价技术规范（XXXX年版）. 中华人民共和国国家卫生健康委员会.
  2. 中药新药研究指南（药理毒理部分）. 国家药品监督管理局.
  3. Smith J, et al. Ammonia-induced pharyngeal inflammation in rats: A model for evaluating demulcents. Lab Anim Sci. 1995; 45(5): 567-572. (示例文献，关注氨水模型)
  4. 李某某， 王某某. XXX方对慢性咽炎模型大鼠咽黏膜病理及血清IL-1β、TNF-α的影响. 中国实验方剂学杂志. 2020; 26(10): 100-106. (示例文献，关注指标)
  5. ISO 10993-2: Biological evaluation of medical devices - Part 2: Animal welfare requirements. International Organization for Standardization.

实验负责人： 实验单位： （可写：某研究机构药理实验室） 日期： XXXX年XX月XX日

重要说明：

  1. 企业名称处理： 全文严格避免提及任何具体企业名称或品牌商品名。提及阳性对照时仅描述“某已上市知名咽喉含片溶液”。
  2. 供试品描述： 仅描述为“某清咽润喉方原料”、“供试品”、“该受试物”或“供试品溶液”，避免暗示特定产品。
  3. 客观性： 报告语言力求客观、准确，基于实验数据得出结论，避免主观评价和夸大宣传用语。
  4. 合规性： 强调了动物伦理审批（IACUC号）和实验动物福利遵循情况，符合国际国内规范。
  5. 剂量设计： 剂量设置（低、中、高）依据研究目的和常规药理实验设计原则，并与人用剂量进行了理论换算（示例）。
  6. 指标选择： 选择了行为学（吞咽次数）、血清炎症因子（TNF-α, IL-1β, IL-6）和组织病理学（H&E染色及评分）等多维度指标综合评价功能，结果相互印证。
  7. 结果讨论： 讨论部分将实验结果与模型特点、潜在机制联系起来，并进行了剂量效应分析及与阳性药的比较，结论基于数据支撑。
  8. 可重复性： 详细描述了动物品系、模型建立方法、给药方案、样品处理及检测方法，具有可重复性。

此报告提供了一个符合科研规范、聚焦功能本身、不含商业信息的清咽润喉动物实验评价模板。实际撰写时，需根据具体实验数据和供试品特性填充细节。