多次皮肤刺激性/腐蚀性试验完整指南
1. 试验目的 本试验旨在评估化学物质经多次重复接触哺乳动物皮肤后，可能产生的局部可逆性刺激效应（刺激性）和/或不可逆性组织损伤（腐蚀性）。其结果对于化学品安全评估、职业健康防护及日用化工产品安全性评价至关重要。
2. 实验动物与准备
- 物种选择： 首选健康成年白色家兔（如新西兰兔），豚鼠或小型猪也可选用。
- 动物准备：
- 试验前约24小时，在动物背部两侧选定区域（约10cm×10cm）轻柔剃毛或剪短被毛，避免皮肤损伤。
- 至少选用3只动物，若预期反应差异大，建议增加动物数量。
- 试验开始前检查皮肤，确保完整健康。
3. 试验物质与剂量
- 受试物形态： 可为液体、半固体（膏/霜）或固体（粉末）。固体需粉碎至适宜粒径或用适当溶剂（如纯水、生理盐水、橄榄油）湿润后使用，溶剂本身应无刺激性且不影响受试物特性。
- 剂量与涂布：
- 每次每部位涂抹量：液体约0.5ml，半固体或固体约0.5g。
- 涂抹面积：约6cm²（如2.5cm×2.5cm）。
- 若使用敷料，应选择惰性、半封闭性材料（如纱布、滤纸），并用非刺激性绷带固定。
4. 试验程序（关键步骤）
- 接触频次与时长：
- 标准周期： 连续或隔天涂抹受试物，每天1次，共连续14天（通常为14次）。
- 单次接触时长： 每次涂布后，受试物应在皮肤上保留约4-6小时。实际接触时间需依据产品预期使用方式或测试目的调整设定。
- 去除： 接触时间结束后，用适宜方法（如温水、生理盐水或温和溶剂）轻柔清除残留受试物和敷料，避免额外刺激。
- 对照设置：
- 必要时设置： 若使用溶剂或赋形剂，需在动物另一侧（或另设动物）设置相应溶剂/赋形剂对照区。
- 观察与记录：
- 观察频率： 每次去除受试物后约1小时（或适宜时间），以及下次涂抹前，均需仔细检查并记录各试验部位的皮肤反应。建议在首次涂抹前、试验期间每日（至少包括第1、3、7、14天）及试验结束恢复期（如第16、21天）进行系统观察。
- 观察指标： 详细记录以下反应及其程度：
- 红斑（发红）形成
- 水肿（肿胀）发生
- 脱屑、裂隙、结痂形成
- 皮肤增厚或硬化
- 出血、渗出、坏死或溃疡（提示腐蚀性）
- 其它异常现象（如疤痕、色素沉着）
- 评分系统： 采用标准化评分表（如Draize评分或其改良版本）量化记录红斑和水肿程度。每日记录单次评分及累积效应。
- 附加监测： 试验期间密切观察并记录动物的全身健康状况（如体重变化、行为异常）。
5. 结果评定
- 刺激反应分析：
- 计算每只动物每日皮肤反应评分（红斑+水肿）。
- 计算每只动物在整个试验期间（14天）的平均每日评分（ADD）。
- 计算所有受试动物的平均ADD（即多次刺激指数或累积刺激指数）。
- 分级标准（示例，具体参照适用法规/指南）：
- 无刺激性： 平均ADD ≤ 0.49。
- 轻度刺激性： 0.50 ≤ 平均ADD ≤ 2.99。表现为轻度、短暂红斑/水肿，可快速恢复。
- 中度刺激性： 3.00 ≤ 平均ADD ≤ 5.99。明显红斑/水肿，可能伴脱屑、结痂，恢复较慢。
- 重度刺激性： 平均ADD ≥ 6.00。严重红斑/水肿，常伴出血、皮肤开裂、深层损伤，恢复时间长。
- 腐蚀性： 试验期间任意时间点观察到不可逆性损伤（如皮肤全层坏死、溃疡形成、焦痂、显著疤痕或持续存在的严重组织破坏），无论评分如何，均应判定为腐蚀性物质。
- 恢复期观察重要性： 恢复期内皮肤反应的消退情况是区分刺激（可逆）与腐蚀（不可逆）的关键依据。即使试验结束时反应严重，但恢复期内能完全愈合，通常判为重度刺激而非腐蚀。
6. 试验报告关键要素 试验报告应清晰包含以下信息：
- 受试物详细信息（物理状态、成分特征（若可行）、所用溶剂/赋形剂）。
- 实验动物详情（种属、品系、性别、数量、来源、体重范围）。
- 试验操作细节（涂抹部位、剂量、涂布方式、接触时长、接触频次、试验周期）。
- 观察方法描述（观察时间点、观察指标、评分系统）。
- 逐日所有动物的个体皮肤反应评分及观察描述。
- 刺激指数计算结果（个体及群体平均ADD）。
- 恢复期观察结果。
- 清晰结论（基于标准判定受试物为无刺激、轻/中/重度刺激或腐蚀物）。
7. 伦理考量与替代方法
- 3R原则： 应遵循替代（Replacement）、减少（Reduction）、优化（Refinement）原则。在科学有效前提下，优先考虑经确认的体外替代方法（如重组人表皮模型试验）。
- 动物福利： 试验操作应最大限度减轻动物痛苦。设定人道终点（如出现严重腐蚀、剧烈疼痛或严重健康恶化），及时终止试验并实施安乐死。
- 法规依据： 试验设计与实施应严格遵循国际（如OECD Test Guideline 404）和国家/地区（如中国GB/T 21604）相关法规与指南要求。
结论 多次皮肤刺激性/腐蚀性试验是评估化学品重复皮肤接触潜在危害的重要手段。其标准化操作与科学严谨的结果判定对于保障人员操作安全、消费者使用安全及环境安全具有不可替代的价值。随着技术进步，符合3R原则的体外替代方法将是未来重要研究方向与发展方向。