消毒产品一次破损皮肤刺激试验指南
1. 目的 本试验旨在评估消毒产品单次接触破损皮肤后可能引发的局部刺激性反应，为产品安全性评价提供关键数据。
2. 原理 通过人工方法（如胶带剥离）在实验动物皮肤制造标准化破损区域，定量涂抹受试消毒产品并密封固定。在规定时间点（如1小时24小时48小时72小时）观察记录接触部位的红斑水肿等皮肤反应程度，依据评分标准量化刺激强度。
3. 试验材料
- 受试物： 待测消毒产品（液态凝胶或膏状）。
- 对照物： 生理盐水（阴性对照）。
- 实验动物： 健康成年家兔（如新西兰兔）或小型猪，雌雄兼用。动物数量需满足统计学要求（通常每组≥3只）。动物福利需严格遵守伦理规定。
- 主要器械： 动物固定装置电动剃毛器无菌手术器械胶带（如医用透气胶带或专用剥离胶带）无刺激敷料（如纱布无纺布）密封膜（如透气性聚氨酯膜）电子天平相机。
- 试剂： 75%乙醇（皮肤准备）麻醉剂（如必要）镇痛剂。
4. 试验步骤
- 动物准备： 试验前24小时，轻柔剃除动物背部两侧毛发（面积约10cm x 15cm/区域）。试验当天检查皮肤无损伤。
- 破损皮肤制备： 在每只动物背部两侧选定对称试验区域。用胶带反复粘贴并快速剥离选定部位（通常≥3次），直至皮肤表面出现轻微发亮但无出血的擦伤。确保损伤程度一致。
- 受试物/对照物应用：
- 每只动物一侧破损区域均匀涂抹适量受试消毒产品（如0.5ml或0.5g）。
- 对侧破损区域涂抹等量阴性对照物（生理盐水）。
- 立即用单层无刺激敷料覆盖，再以密封膜固定，防止蒸发和动物舔舐。
- 暴露时间： 受试物与皮肤持续接触规定时间（通常为4小时或依据产品预期使用时间设定）。
- 敷料移除与清洁： 到达规定时间后，小心移除敷料和密封膜。用温水或生理盐水轻柔清除残留受试物/对照物，避免额外刺激。
- 临床观察与评分：
- 时间点： 在移除敷料后约1小时（评估初期反应）24小时48小时和72小时进行观察评分。
- 观察内容： 仔细检查并记录各试验部位的红斑水肿焦痂形成等反应及其严重程度。
- 评分标准： 采用公认标准（如Draize评分法或其修订版）对红斑和水肿进行量化评分。
5. 皮肤反应评分示例（Draize法）
6. 结果计算与评价
- 计算每只动物在每个观察时间点，受试部位和对照部位的红斑总分和水肿总分（通常为两侧评分的平均值）。
- 计算每个观察时间点，受试组和对照组所有动物红斑平均分和水肿平均分。
- 计算每个观察时间点的原发性刺激指数(P.I.I.)：通常取该时间点受试组红斑平均分与水肿平均分之和。
- 刺激性评价（参考）：
- P.I.I. ≤ 0.4： 无刺激性
- 0.5 ≤ P.I.I. ≤ 1.9： 轻度刺激性
- 2.0 ≤ P.I.I. ≤ 4.9： 中度刺激性
- P.I.I. ≥ 5.0： 强刺激性
- 最终评价： 综合各时间点的观察结果（特别是244872小时），结合刺激指数和皮肤反应的严重程度持续时间及可逆性，对消毒产品的破损皮肤刺激性作出全面评估。重点评价受试组反应是否显著强于对照组。
7. 试验报告内容
- 试验名称目的依据标准
- 受试物和对照物信息（物理性状批号等）
- 实验动物信息（种属品系来源数量性别体重饲养条件）
- 试验步骤详细描述（破损方法剂量敷贴时间观察时间点）
- 皮肤反应评分标准
- 个体动物数据及汇总数据（各时间点红斑水肿评分及P.I.I.）
- 结果统计分析与评价结论
- 试验日期地点主要操作人员
- 遵守动物福利伦理的声明
8. 注意事项
- 动物福利： 严格遵守“3R原则”（替代减少优化）。确保动物操作过程人道，必要时使用麻醉和镇痛措施。试验后根据规定对动物实施安乐死。
- 标准化： 破损程度受试物用量敷贴时间观察评分需严格统一，由训练有素人员进行。
- 环境控制： 动物房温度湿度光照需符合标准。
- 盲法评价： 观察评分人员应不了解受试物分组情况，减少主观偏差。
- 记录完整： 详细记录所有操作观察结果（文字照片）。
- 局限性认识： 动物试验结果外推到人体存在局限性，需结合其他安全性评价数据综合判断。
结论 一次破损皮肤刺激试验是评估消毒产品对受损皮肤安全性的重要环节。通过标准化的动物试验流程和客观评分，可有效识别产品的潜在刺激风险，为产品研发改进及安全使用提供关键科学依据。试验必须始终将动物伦理放在首位，并认识到其作为安全性评价体系一部分的价值与局限。