贴敷类医疗器械无菌测试：关键步骤与质量控制要点
摘要： 无菌是贴敷类医疗器械安全有效的基石。本文依据现行法规和标准，系统阐述无菌测试的核心目的适用范围基本原理标准方法操作要点结果判定及注意事项，为相关产品的质量控制提供技术参考。
一 定义与重要性
- 贴敷类医疗器械： 直接或间接接触创面皮肤，用于吸收渗出液保护创面止血固定等的器械（如各类贴剂敷料创可贴医用胶带等）。
- 无菌： 产品上无存活微生物的状态（药典定义）。
- 无菌测试重要性： 确保产品在临床使用中不会因微生物污染导致创面感染败血症等严重风险，是产品放行和上市的关键质量控制环节。
二 法规与标准依据
- 《中华人民共和国药典》 (现行版，如2020年版四部通则1101)：无菌检查法的强制性标准。
- GB/T 14233.2 医用输液输血注射器具检验方法 第2部分：生物学试验方法。
- ISO 11737-1 医疗器械灭菌 微生物学方法 第1部分：产品上微生物总数的测定。
- 产品技术要求/注册标准： 具体产品注册时提交的技术文件中规定的无菌要求及测试方法。
三 无菌测试基本原理 基于微生物培养原理：
- 洗脱/溶解： 将样品或其代表性部分浸入适宜的无菌稀释液或培养基中，通过振荡超声等方式，将可能存在的微生物从产品上洗脱下来。
- 过滤富集 (薄膜过滤法为主)： 将洗脱液通过孔径≤0.45µm的微孔滤膜过滤，微生物被截留在滤膜表面。
- 培养： 将滤膜转移至规定的培养基上（硫乙醇酸盐流体培养基用于需氧菌和厌氧菌，胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌）。
- 观察： 在规定温度和时间内培养，观察培养基是否有微生物生长迹象（浑浊）。
四 标准测试方法 (以薄膜过滤法为例)
- 样品准备：
- 抽样：按批随机取样，数量需满足统计学要求（通常取≥20个独立包装）。
- 预处理：根据产品特性（如含抑菌成分）进行必要处理（如多次冲洗加入中和剂）。
- 无菌操作：全过程在B级背景下的A级洁净工作台/隔离器中进行，操作人员严格无菌操作。
- 供试液制备：
- 将样品或其部分（如剪碎）放入含适量无菌稀释液（如pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）的容器中。
- 充分振摇或超声，确保微生物有效洗脱。
- 薄膜过滤：
- 将供试液通过已灭菌的薄膜过滤装置过滤。
- 用适量无菌稀释液冲洗滤膜数次（尤其对含抑菌成分产品至关重要），中和并去除残留抑菌剂。
- 过滤完成后，保持滤膜湿润。
- 培养：
- 无菌操作将滤膜转移至硫乙醇酸盐流体培养基试管中。
- 另取一份供试液（或另一张滤膜）转移至胰酪大豆胨液体培养基试管中。
- 硫乙醇酸盐流体培养基管置30-35°C培养不少于14天。
- 胰酪大豆胨液体培养基管置20-25°C培养不少于14天。
- 阳性对照与阴性对照：
- 阳性对照： 在试验中分别加入<100CFU的金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉的菌悬液，同法操作培养。必须生长，证明测试系统有效。
- 阴性对照： 用等量稀释液代替供试液，同法操作。必须无菌生长，证明操作过程未引入污染。
五 结果判定
- 符合规定 (无菌)： 所有供试品管在培养期内均澄清，或虽显浑浊但经确证证明非微生物生长所致。
- 不符合规定 (有菌)： 任何一支供试品管在培养期内呈现浑浊，并经确证证明浑浊由微生物生长引起。
- 复试： 若因测试过程存在明显偏差或仅部分阳性对照未生长导致结果无效，可复试一次。复试方案需明确并说明原因。
六 关键考量与注意事项
- 产品抑菌性： 贴敷类产品常含抑菌剂（如银离子碘壳聚糖）。必须在方法学验证阶段证明所采用的方法（如冲洗量中和剂种类）能有效消除其抑菌作用，避免假阴性。
- 样品代表性： 取样需覆盖不同生产单元不同部位（尤其含药部位粘胶层接触创面层）。
- 方法学验证： 在首次对某产品进行无菌测试前，必须进行方法适用性试验（促生长能力检查+方法有效性验证），证明该方法适用于该产品。
- 环境控制： 严格监控无菌操作环境的洁净度（尘埃粒子沉降菌/浮游菌）压差温湿度等，定期进行环境监测。
- 人员与操作： 操作人员需严格培训，熟练掌握无菌技术。操作过程应快速准确，减少暴露时间。
- 培养观察： 培养期间需定期观察并记录各管状态。对可疑浑浊管，需及时进行革兰染色镜检或转种确证。
- OOS调查： 一旦出现阳性结果（有菌），需严格按照偏差处理程序进行彻底的调查，排查实验室操作环境样品本身或生产过程的污染源，确定根本原因并采取CAPA措施。
七 结论 无菌测试是保障贴敷类医疗器械安全性的最后一道关键防线。严格遵循药典和标准要求，科学严谨地进行方法学验证，在受控环境下规范操作，并结合有效的抑菌性消除措施，才能获得真实可靠的无菌测试结果。持续的监控严格的流程执行以及对异常结果的深入调查，是确保持续提供安全无菌的贴敷类医疗器械的根本保障。
参考文献 (示例格式，需根据实际引用更新)
- 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 (2020年版) 四部. 中国医药科技出版社.
- GB/T 14233.2-2005 医用输液输血注射器具检验方法 第2部分：生物学试验方法.
- ISO 11737-1:2018 Sterilization of health care products — Microbiological methods — Part 1: Determination of a population of microorganisms on products.