重复性损伤性斑贴试验（Repeated Insult Patch Test, RIPT） 是一种评估化学物质（尤其是化妆品、护肤品、外用药品、洗涤剂等）潜在致敏性（诱发过敏性接触性皮炎）和皮肤刺激性的标准化人体皮肤安全性试验方法。其核心在于通过反复多次地施加受试物于同一皮肤部位，模拟日常重复暴露场景，从而更敏感地检测出那些需要多次接触才会引发过敏反应的物质（即致敏原）。
一、 试验目的
-
评估致敏潜力： 主要目的，检测受试物是否可能导致皮肤过敏（IV型超敏反应）。
-
评估累积刺激性： 评估受试物在重复使用下对皮肤产生的非免疫性刺激作用。
-
预测产品安全性： 为化妆品、个人护理品、外用药品等上市前的安全性评估提供关键数据。
-
比较配方差异： 比较不同配方、不同浓度产品的相对致敏性或刺激性。
二、 核心原理
-
诱导阶段（Induction Phase）： 在志愿者（通常50-200人）背部或上臂外侧的正常皮肤上，重复多次（通常9-14次） 施加受试物（通常使用封闭斑贴）。每次施加持续一定时间（通常24或48小时），之后移除斑贴让皮肤休息一段时间（通常24或48小时）。这个阶段旨在“诱导”易感个体产生免疫致敏（如果受试物是致敏原）。
-
休息阶段（Rest Period）： 诱导阶段结束后，让志愿者皮肤完全休息10-14天。这段时间允许潜在的免疫反应（致敏）在体内发展成熟。
-
激发阶段（Challenge Phase）： 在休息期结束后，将受试物重新施加到之前处理过的部位附近的一个新的、未处理过的部位（通常在对侧背部或手臂）。同样使用封闭斑贴，持续48小时。移除斑贴后，在特定时间点（如30分钟、24小时、48小时、72小时或96小时后）由专业皮肤科医生或训练有素的评估员观察并记录皮肤反应。
-
关键点： 如果在激发阶段的新部位出现阳性皮肤反应（红斑、水肿、丘疹、水疱等），强烈表明受试物具有致敏性。因为该部位之前从未接触过受试物，此反应是免疫系统记忆应答的结果，而非单纯的刺激反应。
三、 标准操作流程
| 阶段 | 操作步骤 | 持续时间 | 关键目的 |
|---|---|---|---|
| 筛选 | 招募健康志愿者，签署知情同意书，进行医学筛查排除禁忌症。 | - | 确保受试者适合、安全 |
| 诱导 | 在指定部位（如背部）贴敷含受试物斑贴器（常用Finn Chamber®）。 | 24-48小时 | 反复暴露，诱导潜在致敏 |
| 移除斑贴，清洁皮肤，休息。 | 24-48小时 | 皮肤恢复 | |
| 重复上述“贴敷-移除-休息”循环，通常进行9-14次。 | 约3-6周 | ||
| 休息 | 最后一次诱导贴敷移除后，皮肤无任何处理。 | 10-14天 | 允许免疫系统发展成熟 |
| 激发 | 在新部位（如对侧背部）贴敷含受试物斑贴器。 | 48小时 | 检测是否引发致敏反应 |
| 激发后观察 | 移除斑贴后，在特定时间点（如30min, 24h, 48h, 72h, 96h）由评估员盲法记录反应。 | 至96小时 | 准确判读反应类型和强度 |
| 结果判读 | 根据国际标准（如ICDRG）对反应进行分级。 | - | 区分刺激性与变应性（致敏性） |
| 报告 | 汇总数据，统计分析（如致敏率计算），撰写最终报告。 | - | 提供安全性评估结论 |
四、 皮肤反应评估与判读（关键步骤）
-
评估标准： 普遍采用国际接触性皮炎研究小组（ICDRG） 的评分标准：
-
阴性反应 (-)： 皮肤无变化。
-
可疑反应 (±)： 仅有微弱红斑。
-
弱阳性反应 (+)： 红斑、浸润，可能有散在丘疹。
-
强阳性反应 (++)： 红斑、浸润、丘疹、水疱。
-
极强阳性反应 (+++)： 红斑、浸润、融合性水疱、大疱。
-
刺激性反应 (IR)： 通常表现为焦痂、坏死、界限清晰的红斑、脱屑等（与过敏反应的形态和发生时间可能有差异）。
-
-
关键判读：
-
致敏性证据： 在激发阶段的新部位出现+及以上的阳性反应（红斑、水肿、丘疹、水疱），尤其是在48小时或72小时观察点反应达到高峰，是判断致敏性的主要依据。
-
刺激性反应： 反应可能在诱导阶段就出现，且形态学上可能不同（如更倾向于焦痂、脱屑、界限清晰）。在激发阶段的新部位通常不会出现阳性反应（除非受试物本身具有强原发性刺激）。
-
五、 应用场景
-
化妆品及个人护理品： 护肤品、彩妆、洗发水、沐浴露、染发剂、防晒霜等新产品或新原料上市前的安全性评价。
-
外用药品： 评估局部用药（药膏、贴剂）的致敏风险。
-
家用及工业化学品： 洗涤剂、清洁剂、胶粘剂、金属加工液等接触皮肤产品的安全性评估。
-
医疗器械材料： 评估与皮肤长期接触的器械部件（如电极片、胶带、敷料）的生物相容性（皮肤致敏部分）。
-
原料筛选： 比较不同原料或不同浓度配方的相对致敏性。
六、 优势与局限性
-
优势：
-
直接人体数据： 提供最相关的人体皮肤反应信息。
-
检测迟发型超敏反应： 是检测IV型接触性过敏的金标准方法之一。
-
预测价值较高： 对预测产品上市后引起过敏反应的风险有重要参考价值。
-
标准化： 有相对成熟和广泛接受的标准操作流程。
-
-
局限性：
-
伦理与成本： 需要在人体志愿者上进行，涉及伦理审查，招募和试验成本较高。
-
志愿者变异性： 个体差异（年龄、性别、种族、皮肤状况、已有过敏史）会影响结果。
-
假阳性/假阴性： 可能因刺激反应被误判为过敏（假阳性），或因试验人群缺乏易感个体而漏检弱致敏原（假阴性）。
-
不能完全模拟真实使用： 封闭斑贴可能增强渗透，与实际使用条件（如频率、剂量、部位、是否封闭）不完全一致。
-
主要针对皮肤： 评估的是皮肤局部反应，不直接评估全身毒性或其他器官影响。
-
七、 重要注意事项
-
伦理优先： 试验必须严格遵守伦理规范（如赫尔辛基宣言），获得独立伦理委员会批准，志愿者需充分知情同意。
-
受试物浓度： 通常使用产品的预期使用浓度，或根据预期暴露情况进行合理设定。高浓度可能引发不必要的刺激反应干扰结果。
-
对照设置： 通常会设置阴性对照（如空白斑贴或溶剂/基质对照）和阳性对照（如已知的温和致敏原，如巯基苯并噻唑或苯佐卡因，用于验证试验系统的敏感性）。
-
评估员资质： 皮肤反应的判读必须由经过培训、有经验的专业人员进行，最好采用盲法评估。
-
结果解释： 需结合反应出现的阶段（诱导期 vs 激发期）、形态学特征、强度、持续时间以及阳性率进行综合判断，区分刺激性和变应性反应至关重要。低致敏率（如<1%） 通常被认为是可接受的。
-
安全性保障： 试验中需密切监测志愿者反应，出现强阳性或严重刺激反应应立即终止该志愿者在该部位的测试并给予适当处理。
结论
重复性损伤性斑贴试验（RIPT）是评估化学品，特别是化妆品和个人护理品皮肤致敏潜力的核心人体试验方法。它通过模拟反复暴露的场景，相对敏感地检测出需要多次接触才能致敏的物质。尽管存在成本、伦理和个体差异等局限性，其提供的直接人体数据对于预测产品上市后的皮肤过敏风险具有不可替代的重要价值。规范的操作、严谨的评估和审慎的结果解释是确保RIPT结果可靠、科学的关键。在产品安全性评价体系中，RIPT常与动物替代试验（如LLNA、h-CLAT）、体外试验以及人体使用试验等数据结合，进行综合风险评估。