化妆品一次（急性）皮肤刺激性/腐蚀性试验：保障安全的重要屏障
化妆品直接接触人体皮肤，其潜在的一次性刺激性或腐蚀性风险关乎消费者健康安全。一次（急性）皮肤刺激性/腐蚀性试验是化妆品安全评估体系中不可或缺的核心环节，其目的在于科学评估化妆品或其原料单次涂抹于皮肤后，可能产生的局部不良反应（如红斑、水肿等炎症反应，乃至更严重的组织损伤），为产品安全性提供关键依据。
一、 定义与目的
- 一次性（急性）： 指受试物在短时间内（通常为4小时） 单次应用于皮肤表面。
- 刺激性： 指受试物在皮肤接触部位产生局部、可逆性的炎症反应（非免疫性）。
- 腐蚀性： 指受试物引起皮肤不可逆的组织损伤（坏死），在接触部位出现明显的组织破坏现象（如焦痂形成）。
- 核心目的： 通过标准化的动物或体外替代试验，预测受试化妆品或其成分对人类皮肤产生急性刺激或腐蚀作用的潜在能力等级，为产品配方优化、风险警示标识和安全使用提供科学支撑。
二、 核心原则与法规基础
试验遵循动物福利3R原则（替代、减少、优化），在符合科学要求和监管必要性的前提下，优先采用经过验证的体外替代方法（如重建人体表皮模型试验）。若体外方法无法充分评估或法规要求，则需在严格伦理审查和规范操作下进行动物试验（通常使用健康成年白化家兔）。主要依据包括：
- 《化妆品安全技术规范》 (中国)：明确规定了急性皮肤刺激性/腐蚀性试验的标准方法、评判标准和要求。
- OECD 指南： 如OECD TG 404《急性皮肤刺激性/腐蚀性试验》是国际广泛认可的标准方法学基础。
- 其他相关标准： 如ISO相关标准、美国CPSC方法等。
三、 标准试验方法概述
以下以遵循《化妆品安全技术规范》和OECD TG 404的动物试验方法为例说明核心步骤（强调方法学要点，不涉及具体操作机构）：
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受试物准备：
- 根据产品预期使用形态（液体、固体、膏霜、粉末等），必要时进行标准化处理（如固体研磨、粉末湿润、液体直接使用）。
- 确保受试物在试验条件下物理化学性质稳定。
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试验动物与准备：
- 动物选择： 通常选用健康成年新西兰白兔或其它适宜品系家兔（皮肤相对敏感）。动物数量需满足统计学要求（通常3只有效动物）。
- 动物福利： 试验机构需持有相关资质，严格遵守动物伦理委员会批准的方案。动物饲养环境、饮食、饮水等均需符合规范。
- 皮肤准备： 试验前约24小时，在动物背部两侧（通常为脊柱两旁）小心剪毛或剃毛（不损伤皮肤），暴露足够面积的试验区域（通常双侧各约25平方厘米）。避免使用脱毛剂。
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受试物应用：
- 单次暴露： 将受试物（约0.5ml或0.5g）均匀涂抹于一侧暴露的完整皮肤区域（通常为左侧）。
- 固位： 立即用一层多孔、低致敏性的医用纱布覆盖受试部位，再以无刺激性的半封闭性绷带（如透气胶带）固定，确保受试物与皮肤充分接触至少4小时。防止动物舔舐或移除敷料。
- 对照： 另一侧（右侧）皮肤作为未处理对照或涂抹溶媒对照（如果受试物使用了特殊溶媒）。
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暴露后处理与观察：
- 去除敷料： 4小时（特定情况下可缩短或延长）暴露期结束后，小心移除绷带和残留受试物。常用温水或适宜溶剂温和清洗皮肤。
- 观察期： 观察期为去除受试物后的至少72小时（通常包括去除敷料后1小时、24小时、48小时和72小时）。
- 观察指标：
- 红斑（发红）: 评估程度和范围。
- 水肿（肿胀）: 评估程度和范围。
- 其他损伤： 如焦痂、溃疡、坏死等腐蚀性反应的迹象。
- 评分： 由经过培训的观察员在每次观察点，根据标准化的评分表（见下表概述）对红斑和水肿分别进行评分。记录所有观察到的皮肤反应及其变化趋势。
皮肤反应评分标准概述
- 注：若观察到腐蚀性损伤（如焦痂、坏死），应特别记录其性质和严重程度。
- 结果计算与分级：
- 计算每只动物在每个观察时间点（常取24、48、72小时）的红斑总分和水肿总分。
- 计算每只动物在观察期内所有有效时间点评分的累积均值（总刺激分值）。
- 分级判定（基于累积均值）：
- 无刺激性： 累积均值 ≤ 0.49
- 轻度刺激性： 0.50 ≤ 累积均值 ≤ 2.99
- 中度刺激性： 3.00 ≤ 累积均值 ≤ 5.99
- 重度刺激性： 累积均值 ≥ 6.00
- 腐蚀性判定： 在去除受试物后72小时内观察期内，只要有一只动物出现不可逆的组织损伤（如溃疡、焦痂、坏死），或在14天观察期内出现持续性严重炎症反应，即可判定受试物具有腐蚀性。
四、 替代方法的发展与应用
随着科学进步和动物伦理要求提高，经过验证的体外替代方法在化妆品急性皮肤刺激性/腐蚀性评估中扮演越来越重要的角色，尤其对于规则明确禁止动物试验的化妆品终产品：
- 重建人体表皮模型试验： （如EpiSkin™, EpiDerm™, SkinEthic™ RHE等）应用最广泛。将受试物作用于体外培养的、结构与功能高度模拟人体表皮的3D组织模型上，通过检测细胞活性（MTT或类似方法）降低程度来预测腐蚀性或严重刺激性（通常细胞活力 ≤ 50% 预示腐蚀性/严重刺激）。部分改良模型还可评估炎症因子释放等，用于刺激性分级预测。
- 皮肤刺激性测试（SIT）： 基于经皮电阻（TER）和细胞活性（MTT）的组合测试方法，用于区分刺激物和非刺激物。
- 其他方法： 如膜屏障试验等。
- 法规接受度： 《化妆品安全技术规范》等法规已明确接受部分验证过的体外替代方法用于腐蚀性和严重刺激性的分类。对于刺激性分级，替代方法仍在验证和标准化进程中，常需结合暴露数据和风险评估进行综合判断。
五、 试验结果的意义与应用
一次（急性）皮肤刺激性/腐蚀性试验结果是化妆品安全风险评估报告的重要组成部分，其意义深远：
- 安全分类与标识： 是确定产品是否需要标注警示语（如“刺激性”、“避免接触破损皮肤”）的核心依据。明确腐蚀性或严重刺激性的产品必须采取严格的安全措施。
- 配方优化与筛选： 指导研发人员调整配方成分和浓度，降低产品刺激性，提升消费者使用舒适度和安全性。在原料筛选阶段排除高风险物质。
- 风险评估基础： 为后续的重复染毒毒性、光毒性、致敏性等试验设计和风险评估提供重要参考信息。
- 法规合规性： 是满足国内外化妆品上市前安全评估法规强制性要求的关键数据。
- 消费者安全保障： 最终目的在于最大限度地预防化妆品对消费者皮肤造成急性损伤，保障公众健康。
六、 伦理考量与未来展望
开展此项试验（尤其是涉及动物试验时）必须严格遵守伦理原则：
- 3R原则优先： 绝对优先考虑经过科学验证的体外替代方法。必须进行动物试验时，应尽一切可能减少动物数量、优化试验程序以减轻动物痛苦。
- 伦理审查与监管： 试验方案必须经过独立的动物实验伦理委员会严格审查批准，并在具备资质和良好动物福利保障的机构中进行，接受相关部门的监督。
- 透明化与持续改进： 鼓励试验数据共享和方法标准化，推动更可靠、更人道的新方法和新策略（如整合测试策略ITS、计算机模型）的研发与应用，最终目标是实现完全的动物替代。
结论
一次（急性）皮肤刺激性/腐蚀性试验是构筑化妆品安全防线的重要基石。无论是遵循国际标准的动物试验方法，还是日益成熟并被法规接受的体外替代策略，其核心目标始终如一：科学、准确地识别并评估化妆品单次接触可能引发的皮肤不良反应风险。 试验结果为产品的安全分类、标识、配方优化以及最终保障消费者免受急性皮肤损伤提供了不可或缺的科学决策依据。随着科技发展和对动物福利的日益重视，体外替代方法的完善和应用推广将继续推动该领域向更人道、更高效的方向迈进。