一次性使用卫生用品皮肤变态反应试验指南
引言 一次性使用卫生用品（如卫生巾、护垫、纸尿裤、湿巾、医用敷料等）直接接触人体皮肤，其生物安全性至关重要。皮肤变态反应（即过敏性接触性皮炎）是评估该类产品潜在致敏风险的关键指标。本指南依据GB/T 16886.10《医疗器械生物学评价 第10部分：刺激与皮肤致敏试验》等国际国内通用标准，详细阐述适用于一次性卫生用品的皮肤变态反应试验方法及评价原则。
一、试验目的 评估一次性卫生用品及其原材料、浸提液在重复或延长接触条件下，是否可能诱发实验动物产生皮肤迟发型超敏反应（IV型变态反应），从而预测其对人体皮肤的潜在致敏性风险。
二、试验原理 基于“诱导-激发”模型：
- 诱导阶段： 将受试物（试验材料或其浸提液）多次重复敷贴于实验动物（通常为健康白色豚鼠或小型猪）的同一皮肤区域（剃毛）。此阶段旨在使免疫系统可能对该物质产生致敏。
- 休止阶段： 给予机体约14天的无接触期，使免疫反应得以发展和记忆细胞形成。
- 激发阶段： 将低于诱导浓度的受试物敷贴于动物未接触过该物质的部位（通常为对侧）。观察该部位是否出现红斑、水肿等迟发型超敏反应症状，从而判断动物是否已被致敏。
三、试验方法选择（推荐）
- 封闭式敷贴试验（Buehler Test - BT）：
- 适用性： 尤其适用于成分复杂、不易完全溶解的固体材料（如无纺布、绒毛浆、高分子吸收树脂、塑料膜）及其成品。
- 特点： 采用封闭式斑贴室（如Finn Chamber）将受试物固定于皮肤表面，模拟产品实际使用时的封闭摩擦状态。操作相对温和，专为评估接触性致敏设计，假阳性率较低。
- 动物： 健康白色豚鼠（首选Hartley品系），通常每组至少需10只动物（试验组），同时设立阴性对照组（仅用赋形剂或空白对照材料）和阳性对照组（如已确知的致敏剂，如己基肉桂醛、巯基苯并噻唑）。
四、试验操作流程（以Buehler试验为例）
- 受试物准备：
- 材料本身： 剪裁成适宜大小，可直接用于贴敷；必要时用生理盐水或商品化人工汗液/皮脂浸提（推荐37°C下浸提不少于72小时），使用浸提液或浸提液浓缩物。
- 赋形剂： 根据受试物性质选择合适的溶剂（如生理盐水、水、棉籽油、凡士林、70%乙醇等），确保其无刺激性或致敏性。使用前需进行赋形剂对照试验。
- 浓度： 诱导浓度应足够高以揭示潜在致敏性，但不引起强烈刺激；激发浓度通常低于诱导浓度。需进行预试验确定合适浓度。
- 动物准备： 试验前24-48小时，剃除动物肩胛骨两侧或背部皮肤毛发（面积足够贴敷斑试器），避免损伤皮肤。试验期间单笼饲养，保障适宜环境。
- 诱导阶段：
- 将受试物（材料本身或其浸提液/浓缩物涂于滤纸片）置于斑试器内。
- 牢固粘贴于动物一侧（左侧或右侧）剃毛皮肤。
- 封闭固定6小时（可根据产品使用特点调整，但不建议过短）。
- 移除斑试器，轻柔清洁皮肤。
- 重复： 通常在第0、7、14天进行三次诱导（具体次数根据标准优化）。
- 休止阶段： 最后一次诱导后，让动物休息至少14天（通常14-21天），期间不再接触受试物。
- 激发阶段：
- 将新配制的受试物（浓度通常低于诱导浓度）置于干净斑试器内。
- 粘贴于动物对侧（与诱导部位相对）的剃毛皮肤。
- 封闭固定6小时。
- 移除斑试器，轻柔清洁皮肤。
- 观察与评分：
- 激发后观察时间点： 通常在移除激发斑试器后24小时和48小时进行皮肤反应观察（必要时可延长至72小时）。
- 评分标准： 按以下标准记录每个试验部位的反应强度：
- 记录： 详细记录所有观察结果，包括红斑、水肿、丘疹、皲裂、坏死等。
- 盲法： 观察者应不知晓动物的分组情况（单盲或双盲）。
五、结果分析与评价
- 阴性对照组： 动物应无反应或反应极轻微（评分应为0或偶尔1分）。阴性对照出现显著反应，提示试验系统或操作存在问题，结果可能无效。
- 阳性对照组： 动物应表现出明显的阳性反应（评分通常≥2分），证明试验系统对致敏物敏感且有效。若阳性对照无反应，试验无效。
- 试验组评价：
- 无致敏性： 试验组动物在激发后观察点的皮肤反应发生率及强度（评分）与阴性对照组相比无统计学显著差异（P>0.05）。
- 弱致敏性： 试验组动物皮肤反应发生率或强度轻度高于阴性对照组，且有统计学意义（P≤0.05），但反应程度显著弱于阳性对照组。
- 中度致敏性： 试验组动物皮肤反应发生率或强度明显高于阴性对照组（P≤0.05），部分动物反应程度接近阳性对照组。
- 强致敏性： 试验组动物皮肤反应发生率很高，反应强度等于或超过阳性对照组。
- 综合判定： 结合反应发生率、反应强度、剂量-反应关系以及组织病理学检查结果（如进行），综合评价受试物的潜在致敏性风险等级。评价结论应明确说明产品是否符合相关安全标准（如GB 15979《一次性使用卫生用品卫生标准》中关于致敏试验的要求）。
六、试验报告要求 报告应详细、清晰、透明，至少包含：
- 受试物名称、来源、批号、性状、处理方式（如浸提条件）。
- 试验依据的标准（如GB/T 16886.10）。
- 试验方法名称（如Buehler封闭斑贴试验）。
- 实验动物种属、品系、来源、年龄、性别、数量、饲养条件。
- 受试物浓度、赋形剂、剂量、接触方式及时长。
- 对照组设置（阴性对照、阳性对照物质及浓度）。
- 试验操作具体流程（剃毛、诱导、激发时间点、封闭方式）。
- 观察方法、时间点及详细的皮肤反应评分记录（个体数据）。
- 结果统计分析方法（如卡方检验、Fisher精确概率法）。
- 结果总结（列表或描述各组反应发生率及强度）。
- 结论（明确判定受试物是否具有皮肤致敏性及程度分级）。
- 试验日期、地点、负责人签名。
七、注意事项与伦理考量
- 动物福利： 严格遵循“3R原则”（替代、减少、优化）。试验方案需经动物伦理委员会审批。选择合适方法尽量减少动物痛苦，提供良好饲养环境，试验结束后按规定实施安乐死。
- 假阳性/假阴性：
- 假阳性：可能源于试验材料本身刺激性强（非变态反应性炎症）、操作损伤皮肤、动物个体差异、环境应激等。设计中需设置阴性对照，选择合适的浓度避免过度刺激。
- 假阴性：可能因浓度过低、接触时间不足、动物品系敏感性差异、赋形剂不合适等。设置可靠的阳性对照是关键。
- 结果外推性： 动物试验结果需谨慎外推到人体。阴性结果不能完全排除极少数人发生过敏的可能；阳性结果提示潜在风险，需结合其他毒理学数据和预期临床接触情况综合评估。
- 浸提介质： 应根据产品特性和预期接触途径选择最相关且合理的浸提介质（如生理盐水、人工汗液、棉籽油等）。
- 新材料与工艺： 对于新型原材料、添加剂、粘合剂或生产工艺变更的产品，必须重新进行致敏性评估。
结论 皮肤变态反应试验是保障一次性使用卫生用品安全性的重要环节。严格遵循标准化的试验方法（如封闭式敷贴试验），规范操作，设置充分的对照，并结合科学的评价标准，才能有效识别和控制产品潜在的致敏风险，为消费者健康提供保障。研发和生产机构应高度重视此项检测，将其作为产品上市前生物学评价的常规项目。