一次性卫生用品单次皮肤刺激试验规范
1. 引言 一次性卫生用品（如卫生巾、护垫、纸尿裤、湿巾等）与皮肤存在直接且频繁的接触。因此，评估其接触部位的潜在皮肤刺激风险对于保障消费者安全至关重要。单次皮肤刺激试验是其安全性评价体系中的基础环节，旨在模拟产品在实际使用过程中（通常为单次使用周期）对皮肤可能产生的急性刺激性反应。本规范依据国际通行的皮肤刺激评价原则（如ISO 10993-10, OECD 404）制定，确保试验的科学性与可靠性。
2. 试验目的 通过单次封闭式斑贴试验，初步评估受试样品的材料或其浸提液在规定的接触时间内，对健康实验动物皮肤的潜在急性原发性刺激作用强度，为产品安全性提供早期筛选依据。
3. 试验原理 将受试样品或其代表性材料（或生理盐水浸提液）在规定的剂量（或面积）下，单次应用于实验动物（通常选用新西兰白兔）已备皮的完整皮肤表面，采用封闭式斑贴装置固定，持续接触规定时长（通常为4小时），模拟产品实际使用状态。移除斑贴后，按预定时间点（如移除后即刻、24小时、48小时、72小时）观察并记录试验部位皮肤的红斑、水肿等刺激反应的程度，依据标准分级体系进行评分，以判断样品的局部刺激性。
4. 试验材料与试剂
- 受试样品： 待测卫生用品成品或其代表性接触皮肤的材料（如无纺布面层、吸收芯体表层、塑料膜等）。必要时制备生理盐水浸提液（如评估可溶出物）。
- 实验动物： 健康成年新西兰白兔（New Zealand White rabbits），体重通常≥2.0 kg。选用同性别或雌雄各半。试验前需在标准实验室环境（温度22±3℃, 相对湿度30-70%, 12小时光暗循环）适应性饲养至少7天。
- 阴性对照： 生理盐水（0.9% NaCl）或已知无刺激性的材料（如医用纱布）。
- 阳性对照（可选）： 已知轻度刺激物（如浓度适当的十二烷基硫酸钠溶液），用于验证试验系统敏感性。
- 斑贴材料： 封闭性良好、无刺激性的材料，如铝质斑试小室及配套低致敏性胶带，或专用贴敷装置。
- 备皮工具： 电动剃毛器或脱毛膏（需确认无刺激残留）。
- 消毒剂： 75%医用酒精棉球。
- 观察记录工具： 皮肤刺激反应评分表、计时器、相机（必要时拍照记录）。
5. 试验程序 5.1 准备工作 * 动物随机分组：通常设受试样品组、阴性对照组（生理盐水或惰性材料）。必要时设阳性对照组。每组动物数通常不少于3只。 * 备皮：试验前约24小时，轻柔剃除或脱去动物背部脊柱两侧（左、右区域）的毛发，避免损伤皮肤。每侧备皮面积需满足贴敷要求（通常≥6 cm²）。试验前检查皮肤是否完好无损。 * 受试物准备：固体材料剪裁至合适大小（通常2.5 cm x 2.5 cm），确保边缘光滑无锐角；液体或浸提液则用适量（如0.5ml）浸润在惰性载体（如纱布）上至饱和但不滴流。
- 5.2 贴敷操作
- 试验当日，确认动物备皮区皮肤健康。
- 用酒精棉球轻柔擦拭备皮区域，待其完全干燥。
- 将受试样品/材料（或浸透受试液体的载体）、阴性对照物、阳性对照物（如有）分别放置于对应的斑贴装置内。
- 将斑贴装置紧密、平整地贴敷于动物背部两侧已标记好的位置上。确保受试物与皮肤完全接触。
- 用低致敏性胶带或弹性绷带固定整个装置，防止动物抓挠或脱落。
- 记录贴敷起始时间。
- 5.3 接触与移除
- 受试物与皮肤持续接触规定的固定时长（通常为4±0.1小时）。
- 到达接触时间后，小心移除所有斑贴装置及残留物。
- 立即用温水或生理盐水轻柔清洗接触部位，去除任何残留的受试物或载体。
- 轻柔擦干皮肤。
- 5.4 观察与评分
- 在移除斑贴并清洁后即刻（通常在移除后30-60分钟内）、移除后24±1小时、48±1小时和72±1小时，由经过培训的观察者对每一处贴敷部位的皮肤反应进行独立评估。
- 观察指标：重点观察皮肤红斑（erythema）和水肿（edema）的形成情况。
- 评分标准：采用国际通用的Draize评分体系（或等效标准）：
- 红斑形成 (Erythema and Eschar Formation):
- 0分：无红斑
- 1分：轻微红斑（勉强可见）
- 2分：明显红斑（边界清晰）
- 3分：中度至重度红斑（鲜红色）
- 4分：严重红斑（紫红色）伴或不伴轻微焦痂形成
- 水肿形成 (Edema Formation):
- 0分：无水肿
- 1分：轻微水肿（勉强可见，边缘略隆起）
- 2分：轻度水肿（隆起轮廓清晰）
- 3分：中度水肿（隆起约1mm）
- 4分：重度水肿（隆起超过1mm，超出接触区域）
- 红斑形成 (Erythema and Eschar Formation):
- 记录：详细记录每一观察时间点、每一贴敷部位的红斑评分（E）和水肿评分（O）。必要时拍照存档。
- 5.5 恢复期观察（如适用）
- 若在72小时观察点仍存在明显刺激反应（评分>0），需继续观察直至反应完全消失或达到稳定状态（如至第7天或第14天），记录恢复情况。
6. 数据处理与结果判定
- 计算每只动物、每个贴敷部位在各观察时间点的刺激分值（Primary Irritation Index, PII）： PII = (E + O) / 观察部位总数 （通常单只动物左右两侧分别评分计算）。
- 计算每组的平均刺激分值： 计算所有动物在各观察时间点的平均PII值。
- 判定标准（依据72小时或最严重反应时间点）：
- 无刺激性 (Non-irritating): 平均PII < 0.5
- 轻度刺激性 (Slightly irritating): 平均PII ≥ 0.5 但 < 2.0 （一般情况下，平均PII < 2.3 且无可观察到的腐蚀或严重组织损伤，也可认定为无刺激性或轻度刺激性，需结合具体标准）。
- 中度刺激性 (Moderately irritating): 平均PII ≥ 2.0 但 < 5.0
- 重度刺激性 (Severely irritating): 平均PII ≥ 5.0
- 关键考量：
- 主要依据移除后24、48、72小时观察结果综合判断，特别关注72小时结果。
- 观察反应的可逆性至关重要。即使出现轻度反应，若在短时间内（如72小时内）完全消退，其风险也相对较低。
- 与阴性对照组比较，确认反应由受试物引起。
- 如设阳性对照，需表现出预期的轻度刺激反应，以验证试验系统有效。
7. 试验报告 报告应清晰、完整、准确地包含以下信息：
- 试验名称、唯一标识号、日期、实验室名称（机构信息可保留）。
- 受试样品清晰描述（类型、成分已知则简述关键成分、形态、批次号等）。
- 受试物制备方法（如浸提条件）。
- 实验动物信息（种属、品系、来源、数量、性别、体重范围、饲养条件）。
- 试验设计（分组、对照设置、贴敷部位、接触时间）。
- 详细试验步骤。
- 所有原始观察数据（每个动物、每个部位、每个时间点的E和O评分）。
- 计算过程与结果（各时间点平均PII值）。
- 刺激反应详细描述（包括发生时间、强度、性质、恢复情况）。
- 结果照片（如适用）。
- 结果判定结论（基于平均PII和反应特性，明确受试样品的单次皮肤刺激强度等级）。
- 试验负责人签名及日期。
8. 动物福利与伦理
- 试验必须遵循所在地的动物福利法规和伦理审查要求。
- 严格遵守“3R原则”（替代Replacement、减少Reduction、优化Refinement）。
- 选择此试验必须经过伦理委员会批准。
- 试验过程中尽量减少动物的痛苦和不适。若动物出现严重疼痛或痛苦迹象（如严重红斑、水肿、坏死、动物明显不适），应立即终止该动物的试验并按兽医指导进行处置。
- 试验结束后，动物应得到符合伦理的安置或处理。
9. 局限性与说明
- 主要用于筛选： 单次试验主要评估急性原发性刺激，是产品安全性评价的初筛手段，不能完全预测长期重复使用、累积效应或致敏风险（后者需通过其它试验如重复斑贴试验、豚鼠最大化试验评估）。
- 物种差异： 兔皮肤通常比人皮肤更敏感，试验结果外推到人时需谨慎，阳性结果提示需要进行更深入的人体安全性评估（如人体试用试验）。
- 封闭效应： 封闭式贴敷可能增强某些物质的渗透和刺激性，评估时应考虑产品实际使用方式（如卫生巾有透气性要求）。
- 材料代表性： 样品的选择和处理必须能代表最终产品接触皮肤的关键部分。
结论 一次使用卫生用品单次皮肤刺激试验是评估该类产品急性皮肤接触安全性的重要标准化方法。通过规范化的动物实验操作、严谨的观察评分和结果判定，可以有效识别出具有显著皮肤刺激风险的材料或配方，为产品开发早期筛选和消费者安全提供科学依据。该试验是确保一次性卫生用品安全上市的必要环节之一，其结果需结合其他毒理学数据和最终人体试验数据进行全面的安全性评估。试验的设计、实施和报告必须严格遵守科学规范、伦理准则和动物福利要求。