阪崎肠杆菌检测

阪崎肠杆菌检测：守护婴幼儿食品安全的科学防线

阪崎肠杆菌（Cronobacter sakazakii），曾被称为阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii），是一类革兰氏阴性、无芽孢、周身鞭毛的兼性厌氧杆菌。自19世纪80年代被发现以来，它逐渐被认识到是婴幼儿，尤其是新生儿、早产儿、低出生体重儿或免疫力低下婴儿的一种严重食源性病原体。该菌天然存在于环境（如土壤、水体、植物）中，污染途径多样，特别是对婴幼儿配方奶粉（PIF）等低水分活度食品构成显著威胁。污染配方奶粉等食品中的阪崎肠杆菌在冲调或储存不当条件下可快速繁殖，婴儿摄入后可能引发危及生命的严重感染，如新生儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和败血症，致死率高达40%-80%。

因此，建立并严格执行阪崎肠杆菌的检测方法，对婴幼儿配方食品及其他高风险食品进行有效监控，是预防和控制由其引发的食源性疾病、保障婴幼儿群体生命安全与健康的关键科学屏障与公共卫生基石。

精准检测：方法与技术要点

阪崎肠杆菌的检测是一项精密且要求严格的技术过程，主要依赖于微生物学培养、生物化学及分子生物学等多种技术的整合应用。

1. 样品制备与预增菌：

   • 无菌取样： 严格无菌操作采集样品（如奶粉、环境拭子等），防止引入外源污染。
   • 前处理： 奶粉等干粉样品需按标准比例（如1：10）用无菌缓冲蛋白胨水（BPW）或特定复苏液准确复原。
   • 预增菌： 将复原液或液体样品在无菌状态下转移至无菌容器（如均质袋或锥形瓶），置于适宜温度（通常36±1℃）下培养18-24小时。此步骤旨在修复食品加工或干燥过程中可能受损的阪崎肠杆菌细胞，并使其初步增殖，提高后续检测的灵敏度。

2. 选择性增菌：

   • 取适量预增菌培养物，转移至含有阪崎肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤）的无菌容器中。EE肉汤中添加了万古霉素等选择性抑制剂，可有效抑制大部分革兰氏阳性菌及其他杂菌生长，创造利于阪崎肠杆菌选择性增殖的环境。
   • 在44±0.5℃下振荡培养24±2小时。较高的培养温度有助于进一步抑制背景菌群。

3. 选择性分离（平板划线）：

   • 将选择性增菌培养物划线接种于特定的选择性分离培养基平板。最常用且被国际标准（如ISO、FDA BAM）推荐的核心培养基包括：
     • VRBG琼脂（紫红胆盐葡萄糖琼脂）： 阪崎肠杆菌典型菌落呈现紫红色，直径通常为1-2mm，周围有胆盐沉淀形成的晕圈。
     • DFI琼脂（阪崎肠杆菌显色琼脂）： 基于阪崎肠杆菌特有的酶反应显色，典型菌落呈现蓝绿色（不同配方显色可能略有差异）。该培养基特异性较高。
   • 将接种后的平板在36±1℃环境下倒置培养24±2小时。

4. 可疑菌落筛选：

   • 仔细观察平板上的菌落形态、颜色是否符合相应培养基对阪崎肠杆菌的描述特征。
   • 挑取符合特征的单个可疑菌落，分别划线接种于胰酪胨大豆琼脂（TSA）或营养琼脂（NA）平板，在25±1℃培养48±4小时。此步骤目的在于获取纯培养物以便后续确证试验。

5. 生化确证试验：

   • 传统生化鉴定： 主要依据菌株的碳水化合物发酵能力（如利用蔗糖、D-山梨醇发酵产酸）、特定酶反应（如α-葡萄糖苷酶活性）及关键的生化特性（如黄色素产生、氧化酶反应阴性、赖氨酸脱羧酶阴性、鸟氨酸脱羧酶阳性等）。通常采用标准化商业鉴定系统或根据ISO 22964标准规定的系列生化试验进行判定。
   • 自动化鉴定系统： 多种基于生化反应的自动化仪器（如VITEK、BD Phoenix、MicroScan等）可提供快速准确的阪崎肠杆菌鉴定结果。
   • 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）： 利用菌体蛋白指纹图谱进行快速种属鉴定，具有高通量、高速度和较高准确度的优势。

6. 分子生物学确证：

   • 实时荧光定量PCR（qPCR）： 直接针对阪崎肠杆菌特异性基因片段（如ompA基因、dnaG基因、gltA基因等）设计引物和探针，对增菌培养物或分离菌株DNA进行实时扩增与荧光检测。该方法特异性强、灵敏度高、速度快，可在几小时内完成确证，已成为主流确证方法。
   • 多重PCR： 可同时检测多个靶基因，提高检测效率和信息量。
   • 基因测序： 通过对特定基因（如16S rRNA基因管家基因或特异性更强的基因片段）进行测序分析，与数据库中标准序列比对，可实现最精确的种属鉴定。

确保可靠性的关键要素

阪崎肠杆菌检测结果的准确可靠依赖于严格的质量控制体系：

• 培养基验证： 使用前必须采用标准菌株验证所有培养基（增菌液、分离平板）的选择性和生长特性是否符合要求。
• 阳性与阴性对照： 每批次检测必须同时设立已知阳性菌株（验证引物/培养基有效性）和阴性对照（无菌水或缓冲液，排除污染）作为参照。
• 无菌操作： 整个检测过程必须在无菌条件下进行，严防交叉污染。
• 设备校准与环境监控： 培养箱、水浴锅、移液器等关键设备需定期校准；实验室环境（温度、湿度、洁净度）需持续监控。
• 人员培训与资质： 检测人员需经过严格的专业培训并具备相应资质，熟练掌握标准操作规程（SOP）。

精准检测的价值：守护与未来方向

阪崎肠杆菌检测绝非单纯的实验室操作流程，而是保障婴幼儿群体远离致命威胁的重要科学防线。其核心价值不仅体现在：

• 严格监控原料与成品： 对婴幼儿配方食品生产链实施常态化精准检测，最大限度降低阪崎肠杆菌污染风险。
• 溯源调查与控制： 在出现病例或污染事件时，迅速溯源定位污染源，实施精准防控措施。
• 改进生产工艺： 检测数据为优化配方奶粉生产流程（如热处理工艺、包装密封性设计）提供关键科学依据。
• 保障公共卫生与消费者信心： 有效降低食源性疾病的发生率，守护脆弱人群健康，维护公众对婴幼儿食品安全的高度信任。

随着科技的飞速发展，阪崎肠杆菌检测技术也在不断创新与融合。基于等温扩增技术（如LAMP、RPA）的新型快速检测方法逐步成熟；结合微流控芯片、生物传感器前沿技术的便携式现场检测设备正逐步应用于基层筛查；宏基因组测序技术为复杂样本中的病原体精准识别提供了新思路。这些进步共同推动着检测向超快速、高灵敏、简便便携、智能自动化的方向发展，为婴幼儿食品安全筑起更为坚固、高效的科技屏障。

通过持续精进检测技术与严格执行标准规范，我们方能切实降低阪崎肠杆菌引发的健康风险，为每一名新生命创造真正安全、健康的起点。