减肥功能（功能学动物试验）

减肥功能动物试验规范指南（功能学评价）

动物试验在评价保健食品减肥功能中扮演着不可或缺的角色。它为初步验证产品功效、探索潜在作用机制及评估安全性提供了严格的科学基础。本指南依据《保健食品检验与评价技术规范》及相关科学原则，概述规范化的试验实施方案。

一、 试验设计基本原则

1. 法规遵从性： 严格遵循国家相关管理部门发布的现行有效《保健食品检验与评价技术规范》及其配套文件中对减肥功能评价的具体要求。
2. 科学性与规范性： 试验设计需基于科学原理，采用公认的标准方法，确保操作流程规范、数据记录真实完整。
3. 随机、对照、重复： 实验动物必须随机分配到各组。设立合理的对照组（模型对照、空白溶剂对照）。保证足够的动物数量以满足统计学要求。
4. 人道主义与伦理： 所有操作均需通过实验动物福利伦理审查委员会批准，遵循“3R”（替代、减少、优化）原则，最大限度减少动物痛苦。
5. 剂量合理性： 受试物设置低、中、高三个剂量组，剂量设计应参考人体推荐摄入量进行科学换算（通常按体重折算等效倍数）。同时设立阳性对照组（如使用已验证功效的合法药物）。
6. 周期适宜性： 试验周期需足够长以观察减肥效果，通常为8-12周，具体依据模型建立时间和观察终点而定。

二、 动物模型选择与建立

1. 首选动物：
   • SD大鼠（Sprague-Dawley大鼠）： 最为常用，对高脂饲料诱导的肥胖敏感，生理代谢特点研究透彻。
   • Wistar大鼠： 也是常用品系。
   • C57BL/6J小鼠： 对高脂饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗高度敏感，适用于遗传背景要求较高的研究或空间受限时。
   • 其它模型： 如ob/ob小鼠、db/db小鼠（遗传性肥胖模型），可用于特定机制研究（成本较高，非首选）。
2. 肥胖模型建立方法：
   • 饮食诱导肥胖（DIO）模型： 最常用且最接近人类获得性肥胖。
     • 饲料： 使用特定配方的高脂饲料（脂肪供能比通常为45%-60%）或高脂高糖饲料。
     • 周期： 连续饲喂4-12周（根据动物品系、年龄和所需肥胖程度调整）。
     • 模型成功标准： 高脂组体重显著高于普通饲料对照组（通常要求差异>10%-20%），并伴有体脂率升高、血脂异常等特征。

三、 实验分组与处理

1. 基础分组：
   • 普通饲料对照组： 饲喂维持饲料。
   • 肥胖模型对照组（模型对照组）： 饲喂高脂饲料+给予溶剂（如纯净水、羧甲基纤维素钠溶液等）。
   • 受试物低剂量组： 高脂饲料+低剂量受试物。
   • 受试物中剂量组： 高脂饲料+中剂量受试物。
   • 受试物高剂量组： 高脂饲料+高剂量受试物。
   • 阳性对照组（可选但推荐）： 高脂饲料+已知有效剂量的合法减肥药物对照品。
2. 受试物给予方式： 通常采用灌胃法，也可根据产品特性掺入饲料或饮水（需准确计算摄入量）。给予体积需标准化。
3. 周期： 模型建立后开始给予受试物/对照物，持续8-12周。期间定期称重、记录摄食量。

四、 关键观测指标

1. 体重与摄食量：
   • 每周至少称量体重1-2次，计算体重增长值（试验结束体重 - 试验开始体重）及体重增长率。
   • 每日或定期精确记录摄食量（笼为单位），计算食物利用率（体重增长(g) / 摄食量(g)）。
2. 体脂含量与分布（核心指标）：
   • 解剖法（金标准）： 试验结束时，麻醉处死动物，解剖分离特定脂肪垫（如肾周脂肪、睾周脂肪、腹膜后脂肪）并称重，计算脂体比（脂肪重/体重*100%）。必要时分离全身脂肪称总脂重。
   • 影像学方法（可选）： 如小动物活体CT（Micro-CT）或磁共振成像（MRI），可无创、重复测量体内脂肪含量和分布（成本高）。
3. 脂肪细胞形态学：
   • 取代表性脂肪组织（如附睾脂肪垫）进行石蜡包埋、切片、苏木素-伊红（H&E）染色。
   • 显微镜下观察脂肪细胞大小（肥大）和数量（增生）变化。可使用图像分析软件定量测定平均脂肪细胞面积/直径。
4. 血脂水平：
   • 试验结束前禁食（通常12小时），采集血液，分离血清。
   • 检测指标：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等。
5. 血清生理指标：
   • 血糖与胰岛素： 检测空腹血糖、胰岛素水平，计算胰岛素抵抗指数（如HOMA-IR）。
   • 脂肪因子与炎症因子： 如瘦素（Leptin）、脂联素（Adiponectin）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等（根据研究目的选测）。
6. 一般健康状况监测： 观察动物行为、被毛、精神状态、粪便性状等，试验结束时进行大体解剖观察主要脏器有无肉眼可见病变。

五、 数据处理与结果判定

1. 数据整理： 系统整理所有原始数据。
2. 统计分析：
   • 数据以均值±标准差表示。
   • 采用适当的统计学方法进行分析（如t检验、单因素方差分析ANOVA，必要时进行多重比较如LSD检验、Dunnett's检验等）。
   • 比较各剂量组与模型对照组之间的差异显著性。
   • 关注受试物剂量-效应关系。
3. 结果判定（遵循法规标准）：
   • 核心标准： 与模型对照组相比，
     • 高剂量组体重或体重增重显著降低（P<0.05）。
     • 且 高剂量组体脂含量（脂体比或特定脂肪垫重量）显著降低（P<0.05）。
   • 辅助支持：
     • 中、低剂量组体重或体脂有一项或两项指标显著降低（P<0.05），呈现一定量效关系更佳。
     • 食物利用率显著降低。
     • 脂肪细胞呈现减小趋势（肥大改善）。
     • 血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）显著降低，或高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）显著升高。
     • 胰岛素敏感性相关指标改善（如空腹血糖、胰岛素、HOMA-IR显著降低）。
   • 判定原则： 必须满足核心标准（高剂量组体重和体脂均显著降低），方可初步判定受试物具有辅助减肥功能作用。辅助指标阳性可作为支持证据。若仅体重下降而体脂未显著降低，或仅体脂降低而体重未显著下降，通常不能单独判定减肥功能。

六、 报告撰写要点

1. 完整清晰： 包含试验目的、依据、受试物信息（来源、性状、处理方式、浓度）、动物信息（品系、来源、级别、体重、年龄）、试验环境（温湿度、光照周期）、饲料配方（详细组分和供能比）。
2. 方法详实： 详细描述分组方法、模型建立过程、受试物给予途径与剂量、试验周期、各项指标的检测方法（引用标准方法或详述操作步骤）。
3. 数据客观： 列出所有原始数据和统计处理结果（均值±标准差、统计方法、P值）。
4. 结果规范： 使用图表（体重增长曲线、脂肪重量图、组织切片图等）配合文字客观描述结果。清晰标注显著性差异。
5. 结论明确： 严格按照判定标准，基于数据和统计分析，给出受试物是否具有辅助减肥功能作用的结论。
6. 讨论分析（可选但建议）： 结合结果和现有知识，探讨可能的机制或局限性。

七、 重要注意事项

1. 模型成功率： 严格监控高脂饲料诱导效果，确保模型对照组动物确实形成显著肥胖，是试验有效的基础。
2. 动物福利： 贯穿始终，确保人道管理、饲养和操作。
3. 排除非特异影响： 关注受试物对摄食量、动物活动量的影响。若受试物导致摄食量显著减少（尤其是非预期的、影响动物健康的厌食），需谨慎解读体重下降是否为健康减肥效果。
4. 高脂饲料一致性： 不同批次高脂饲料需保证配方和营养组分稳定。
5. 操作标准化： 解剖取脂、称重、血清分离等操作需由训练有素的人员按标准流程进行，减少误差。
6. 质量控制： 实验过程应有完善的质量控制措施和记录。

结论：

规范化的减肥功能动物试验是科学评价保健食品功效的关键环节。通过精心选择适宜的动物模型（如高脂饮食诱导的SD大鼠肥胖模型），严格按照随机、对照、重复的原则设计试验，全面监测体重、体脂（脂体比为金标准）、脂肪细胞形态及血脂代谢等核心指标，并依据法规标准进行严谨的统计学分析和结果判定（核心是体重和体脂均显著降低），才能获得可靠的科学证据，为后续研究与应用奠定坚实基础。所有试验必须恪守动物伦理原则。

关键提醒：

• 本指南所述方案基于当前（截至2023年）国内通行的规范和要求。实际操作前务必查阅并遵循国家权威部门发布的最新版《保健食品检验与评价技术规范》及其修订补充文件。
• 动物试验结果是功能评价的重要组成部分，但其结论不能直接外推到人体。产品的最终功效确认需结合人体试食试验等多方面证据。