总可溶性膳食纤维检测方法
一、检测原理
本方法基于酶-重量法，通过模拟人体消化过程，利用特定酶解体系去除样品中的淀粉、蛋白质与脂质，保留膳食纤维组分。可溶性纤维经乙醇沉淀分离，最终通过重量法测定含量。
二、试剂与材料
- 酶制剂
- 耐热α-淀粉酶（pH 6.0, 95–100℃）
- 蛋白酶（pH 7.5, 60℃）
- 淀粉葡萄糖苷酶（pH 4.5, 60℃）
- 缓冲液
- 0.08 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.0）
- 0.1 mol/L 乙酸缓冲液（pH 4.5）
- 0.2 mol/L MES-TRIS缓冲液（pH 8.2）
- 沉淀剂
- 95% 乙醇（预热至60℃）
- 78% 乙醇溶液
- 清洗剂
- 丙酮、无水乙醇
- 其他
- 硅藻土（经酸洗处理）
- 真空抽滤装置（玻璃砂芯坩埚，孔径40–60 μm）
三、操作流程
1. 样品预处理
- 固体样品：粉碎过0.5 mm筛，匀浆后冷冻干燥。
- 液体样品：直接取用或浓缩处理。
2. 酶解步骤 （全程振荡水浴） ① 淀粉水解
- 取1 g样品（精确至0.1 mg） + 50 mL磷酸盐缓冲液
- 加0.1 mL耐热α-淀粉酶 → 95℃水浴30 min（每5 min振荡）
② 蛋白酶解
- 冷却至60℃，调节pH至7.5
- 加0.1 mL蛋白酶 → 60℃水浴30 min
③ 二次淀粉水解
- 调节pH至4.5，加0.1 mL淀粉葡萄糖苷酶 → 60℃水浴30 min
3. 可溶性纤维沉淀
- 加入预热95%乙醇（样品体积的4倍）→ 室温静置60 min
- 真空抽滤（玻璃砂芯坩埚+0.5 g硅藻助滤剂）
4. 洗涤与干燥
- 沉淀依次用：78%乙醇（20 mL×2）、95%乙醇（10 mL）、丙酮（10 mL）洗涤
- 105℃烘箱干燥至恒重（约4 h）→ 冷却称重（�1m1）
5. 蛋白质与灰分校正
- 取半数沉淀测蛋白质（凯氏定氮法，系数6.25）→ 蛋白质质量（��mp）
- 剩余沉淀525℃灰化4 h → 灰分质量（��ma）
四、结果计算
TSDF(%)=(�1−��−��)−�空白样品质量×100TSDF(%)=样品质量(m1−mp−ma)−m空白×100 注：
- �空白m空白：试剂空白组沉淀质量（同流程处理无样品体系）
- 结果保留两位有效数字
五、关键控制点
- 酶活性验证
- 每批酶需用阳性对照品（如小麦淀粉、酪蛋白）验证水解效率。
- pH精度
- 酶解阶段pH偏差需≤0.1单位，避免酶失活。
- 沉淀条件
- 乙醇终浓度需≥78%，否则可溶性纤维回收率降低。
- 干扰排除
- 高糖样品需增加乙醇比例（5:1）防止共沉淀。
六、方法特性
七、注意事项
- 实验全程需佩戴防护装备，乙醇操作远离明火。
- 玻璃砂芯坩埚使用前需恒重，冷却需置于干燥器。
- 含果胶/β-葡聚糖样品可能需延长沉淀时间至90 min。
附录：技术依据
本方法整合AOAC 991.43、AACC 32-07标准核心步骤，适配常规实验室条件。适用于谷物、果蔬、加工食品中可溶性纤维（包括果胶、树胶、部分半纤维素等）的定量分析。
本指南仅提供学术与研究用途，具体操作需结合实验室安全规程执行。