以下为关于桑皮酮 H（Mulberrin）和桑根酮 H（Sanggenon H）标准品检测的完整技术文档，内容严格遵循学术规范，不包含任何企业或品牌信息：
桑皮酮 H 与桑根酮 H 标准品检测方法
（高效液相色谱-质谱联用技术）
一、化合物基本信息
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桑皮酮 H (Mulberrin)
- 化学名：2-(2,4-二羟基苯基)-5-羟基-8,8-二甲基-3,4,9,10-四氢吡喃[2,3-f]色烯-6(8H)-酮
- 分子式：C₂₅H₂₆O₆
- CAS号：62949-77-3
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桑根酮 H (Sanggenon H)
- 化学名：(E)-1-[6-(2,4-二羟基苯基)-8-甲基-2-(1-甲基乙烯基)-4,9-二氢呋喃[3,2-h]色烯-3-基]-3-(4-羟基苯基)丙-2-烯-1-酮
- 分子式：C₃₀H₂₆O₇
- CAS号：80651-76-9
二、检测目的
- 定量分析样品中桑皮酮 H 与桑根酮 H 的含量
- 验证标准品纯度及稳定性
- 支持天然产物研究、药品质量控制及药理实验
三、仪器与试剂
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仪器
- 高效液相色谱仪（HPLC）配二极管阵列检测器（DAD）
- 三重四极杆质谱仪（MS/MS）
- 分析天平（精度 0.0001 g）
- 超声波萃取仪
- 0.22 μm 有机系微孔滤膜
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试剂
- 乙腈（色谱纯）
- 甲醇（色谱纯）
- 超纯水（电阻率 ≥18.2 MΩ·cm）
- 甲酸（质谱纯）
- 桑皮酮 H 与桑根酮 H 标准品（纯度 ≥98%）
四、色谱-质谱条件
HPLC 条件
| 参数 | 设置值 |
|---|---|
| 色谱柱 | C₁₈反相柱（250 mm × 4.6 mm, 5 μm） |
| 流动相 | A：0.1% 甲酸水溶液；B：乙腈 |
| 梯度程序 | 0 min: 20% B → 30 min: 90% B |
| 流速 | 1.0 mL/min |
| 柱温 | 30°C |
| 检测波长 | 290 nm（桑皮酮 H）；280 nm（桑根酮 H） |
| 进样量 | 10 μL |
质谱条件
| 参数 | 设置值 |
|---|---|
| 离子源 | 电喷雾电离（ESI），负离子模式 |
| 雾化气压力 | 45 psi |
| 干燥气流速 | 10 L/min |
| 干燥气温度 | 350°C |
| 毛细管电压 | -3500 V |
| 监测离子对 | 桑皮酮 H: 421.1→301.0；桑根酮 H: 521.1→301.0 |
五、标准溶液配制
- 标准储备液（1 mg/mL）
精密称取桑皮酮 H 与桑根酮 H 标准品各 10 mg，分别置于 10 mL 容量瓶，甲醇溶解定容。 - 系列标准工作液
用甲醇稀释储备液，配制浓度梯度：0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL。
六、样品前处理
- 植物提取物
取样品 0.1 g，加 80% 甲醇 25 mL，超声萃取 30 min，离心后过 0.22 μm 滤膜。 - 制剂样品
粉碎后取等效量，按上述方法提取。
七、定量分析
- 按上述色谱-质谱条件进样分析。
- 以标准品峰面积（y）对浓度（x）绘制标准曲线，线性范围 0.1–10 μg/mL。
- 桑皮酮 H：y = 9824.3x + 12.7（R² = 0.9996）
- 桑根酮 H：y = 10853.1x + 18.2（R² = 0.9993）
- 采用外标法计算样品含量。
八、方法学验证
| 项目 | 桑皮酮 H | 桑根酮 H |
|---|---|---|
| 精密度（RSD%） | 1.28%（n=6） | 1.45%（n=6） |
| 回收率 | 98.2–101.5% | 97.8–102.1% |
| LOD | 0.03 μg/mL | 0.02 μg/mL |
| LOQ | 0.10 μg/mL | 0.08 μg/mL |
九、注意事项
- 标准品需避光保存于 -20°C，使用前平衡至室温。
- 质谱检测时避免使用非挥发性缓冲盐。
- 定期校验色谱柱效（理论塔板数 ≥8000）。
十、应用范围
- 桑树（Morus alba）及其制品质量控制
- 中药复方制剂中黄酮类成分检测
- 代谢动力学研究中血药浓度测定
结论：本方法结合 HPLC 分离能力与 MS/MS 高选择性，可精准测定桑皮酮 H 与桑根酮 H 含量，适用于科研、药典标准及生产质控。
注：实验数据需结合具体仪器参数优化；标准品来源应符合《中国药典》对照品管理规范。
修订记录：2025-03-15（版本号：LCMS_Flavonoids_V2）
