半自动生化分析仪计量校准技术指南
为确保半自动生化分析仪检测结果的准确可靠，定期的、科学的计量校准至关重要。以下是其核心校准要点与流程：
一、校准核心参数与依据
- 光度系统：
- 波长准确度与重复性： 使用标准干涉滤光片或汞灯/氘灯特征谱线进行验证（如汞灯546.1nm, 氘灯486.0nm, 656.1nm）。
- 吸光度准确度： 采用经上级计量机构检定合格的吸光度标准物质（如重铬酸钾溶液、中性滤光片）。
- 吸光度线性与稳定性： 使用不同浓度的吸光度标准溶液或中性滤光片组合进行测试。
- 杂散光： 选用特定浓度的截止型滤光片或溶液（如亚硝酸钠溶液于340nm处）。
- 加样系统：
- 加样量准确度与重复性： 使用高精度天平（万分之一及以上）称量纯水的重量，换算为体积，评估不同预设体积（如5μL, 10μL, 20μL）下的误差。
- 温控系统（若具备）：
- 温度准确度与稳定性： 使用经检定合格的精密温度计或温度测量仪插入反应杯（槽）中测量实际温度，并与仪器设定值比对。
- 交叉污染：
- 采用高浓度与低浓度溶液交替进样测试，评估残留影响。
二、校准前准备
- 环境要求：
- 无尘、无强电磁干扰、无剧烈震动。
- 温度：(23 ± 5)℃，相对湿度：< 80%（具体参考说明书）。
- 仪器准备：
- 开机预热至规定时间（通常≥30分钟）。
- 清洁仪器内外，特别是比色杯、样品针、试剂针、搅拌棒等关键部件。
- 检查光源能量状态，必要时更换光源。
- 检查管路是否有泄漏、结晶或堵塞。
- 标准物质与设备：
- 选用符合国家标准、经有效溯源（具有检定/校准证书）的标准物质（吸光度标准品、波长标准器、温度计等）。
- 准备高精度电子天平（校准加样）、精密温度测量设备（校准温控）。
- 准备符合要求的纯水（稀释、清洗）。
- 人员：
- 操作人员需熟悉仪器原理、性能、操作流程及校准规范，经专业培训。
三、校准实施流程
- 外观与基本功能检查：
- 检查仪器标识、显示屏、按键、开关是否正常。
- 检查样品针、试剂针移动是否顺畅，搅拌棒运转是否正常。
- 检查比色杯是否清洁、无划痕裂纹。
- 光度系统校准：
- 波长： 放入波长标准器（滤光片或光源），运行仪器波长扫描或测试程序，记录特征峰位置，计算与标准波长的偏差及重复性。
- 吸光度：
- 用空白液（如蒸馏水）调零或基线。
- 测试吸光度标准物质（如特定浓度的重铬酸钾溶液），记录仪器显示吸光度值（A测）。
- 计算误差：ΔA = A测 - A标（A标为标准物质证书给定值）。
- 在不同浓度点测试，评估线性范围。
- 杂散光： 在特定波长（如340nm），测试高浓度截止溶液（如50g/L亚硝酸钠），记录的吸光度值即为该波长下的近似杂散光水平。
- 加样系统校准：
- 设置仪器至加样测试模式（如水）。
- 将加样针移至干燥洁净的称量容器（如小烧杯、EP管）上方。
- 执行加样操作（每个设定体积重复测量10次）。
- 立即用高精度天平称量容器+水的总质量。
- 计算每次加样水的实际质量（m实 = m总 - m空），换算为体积（V实 = m实 / ρ， ρ≈0.998 g/mL @20℃）。
- 计算：
- 误差(%) = [(V实 - V设) / V设] × 100% (V设为设定体积)
- 重复性(SD/RSD) = 标准差 / 平均值 × 100%
- 温控系统校准（适用时）：
- 启动温控系统，设定至常用温度（如37℃）。
- 待温度稳定后（通常≥30分钟），将校准过的精密温度计探头（或专用温度测试仪探头）插入充满纯水（或专用导热液）的反应杯（槽）中心位置。
- 稳定后记录温度测量仪的读数（T实）。
- 计算与设定温度（T设）的偏差：ΔT = T实 - T设。
- 连续监测一段时间（如10分钟），记录波动范围（最大值-最小值），评估稳定性。
- 交叉污染测试（可选但推荐）：
- 配制高浓度有色溶液（如高浓度伊文思蓝溶液）和低浓度溶液（如蒸馏水）。
- 按“高-低-高-低...”顺序连续进样多次。
- 观察低浓度样本结果的异常升高情况（相对于单独测试低浓度溶液的结果），评估污染程度。
四、校准结果处理与确认
- 原始记录： 详细记录校准日期、环境条件、使用标准器信息（名称、编号、有效期）、校准数据、操作人员和复核人员签名。
- 数据处理： 计算各项参数的误差、重复性（RSD）、线性相关系数等。
- 符合性判定： 将计算结果与仪器说明书技术指标或国家/行业相关计量技术规范/JJF规定的要求进行比对。
- 示例（典型要求）：
- 波长误差：≤±2nm
- 吸光度误差：±0.01A以内（如0.5A点）
- 加样误差：±(1.0%~2.0%)以内，重复性RSD≤1.0%
- 温度偏差：±0.3℃以内，波动≤±0.2℃
- 示例（典型要求）：
- 校准报告： 出具包含校准依据、所用标准器、校准项目、结果数据、结论（合格/不合格/修正后使用）的校准证书或报告。
- 计量确认： 根据校准结果和使用要求（如检测项目的允许总误差），判断仪器是否满足预期用途。
- 校准状态标识： 对仪器粘贴校准状态标签（如合格/限用/停用），注明有效日期。
五、校准周期
- 校准间隔应根据仪器使用频率、稳定性、维护状况、历史校准数据、检测项目重要性及实验室自身风险管理要求确定。
- 通常建议每年进行一次全面计量校准。
- 对于关键部件（如加样器）、使用频繁或对结果影响重大的参数，可适当缩短期间核查或功能性检查的间隔（如每季度或每半年）。
六、重要注意事项
- 溯源至上： 使用的计量标准器具必须能溯源至国家或国际计量标准。
- 规范先行： 校准必须依据现行有效的国家计量检定规程（JJG）、计量校准规范（JJF）或经过确认的实验室内部校准规程。无规范时，应参考权威说明书制定严谨方法。
- 试剂耗材质量： 使用高质量的纯水、标准物质和清洁剂。
- 维护是基础： 严格的日常和定期维护是保障校准有效性和仪器长期稳定运行的关键。
- 人员能力： 操作人员的技术水平直接影响校准结果的可靠性。
- 记录完整性： “做我所写，写我所做”，完整、清晰、可追溯的记录是校准工作的核心要求。
七、结论
严谨、规范的计量校准是确保半自动生化分析仪性能可靠、检测数据准确的基石。实验室应建立完善的校准管理程序，覆盖标准器管理、人员培训、校准实施、结果确认和档案保存全过程，并严格遵守相关技术规范。通过科学的校准活动，有效控制分析前的仪器误差，为临床诊断和科研实验提供坚实的数据质量保障。