HE染色、特殊染色

HE染色与特殊染色：组织学的色彩密码

在组织病理学的世界里，色彩不仅是视觉呈现，更是解读组织结构和病变的关键语言。苏木精-伊红（HE）染色作为基石，与特殊染色技术共同构成了组织学研究不可或缺的工具箱。

HE染色：组织学诊断的基石

• 基本原理：

  • 苏木精（Hematoxylin）： 碱性染料，主要与细胞核内带负电荷的脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）结合，将胞核染成鲜明的蓝色或蓝紫色。需要媒染剂（如铝盐）增强着色和稳定性。
  • 伊红（Eosin）： 酸性染料，主要与细胞质内带正电荷的氨基酸残基（如精氨酸、赖氨酸）以及细胞外基质中的蛋白质结合，将胞浆、胶原纤维、肌纤维、红细胞等染成深浅不一的粉红色或红色。

• 标准流程概述：

  1. 脱蜡与水化： 去除包埋石蜡，使切片复水。
  2. 苏木精染色： 细胞核着色。
  3. 分化： 使用弱酸溶液（如盐酸乙醇）选择性去除胞浆等非特异性染色。
  4. 返蓝： 使用弱碱性溶液（如自来水、氨水）使苏木精染色转变为稳定的蓝色。
  5. 伊红染色： 胞浆及特定基质着色。
  6. 脱水： 梯度乙醇逐步去除水分。
  7. 透明： 二甲苯置换乙醇，提高透明度。
  8. 封固： 使用中性树胶封片，长期保存。

• 核心价值：

  • 全面显示组织结构： 清晰区分细胞核与细胞质，呈现细胞形态、排列方式、核质比例、组织层次（上皮、固有层、肌层等）。
  • 识别基本病变： 观察炎症（炎细胞浸润）、坏死（核固缩、碎裂、溶解）、变性（细胞水肿、脂肪变）、肿瘤（细胞异型性、核分裂像、组织结构异型）等。
  • 常规诊断基础： 是病理诊断最常用、最基础的染色方法，绝大多数病例首先依靠HE染色进行初步观察和诊断。

特殊染色：针对特定目标的精准利器

特殊染色是针对HE染色未能充分显示或特异性识别的特定组织成分、病原微生物或特定病变而设计的技术体系。

• 设计原理： 利用目标物质的物理化学特性（如电荷、溶解度）、生化特性（如糖类、酶类）或组织化学反应，选择性地使用特定染料或进行化学反应使其显色。

• 常见类型及应用：

  1. 结缔组织染色：
     • Masson三色染色： 区分胶原纤维（蓝/绿）、肌纤维（红）、胞核（蓝黑）。用于观察纤维化（如肝硬化、肾小球硬化）、平滑肌增生、肿瘤间质。
     • Van Gieson染色： 胶原纤维（红）、肌纤维（黄）、胞核（棕黑）。应用类似Masson染色。
     • 网状纤维染色 (如Gordon-Sweets法)： 显示网状纤维（黑色）。用于研究组织结构（如肝窦、淋巴结）、基底膜（如原位癌与浸润癌鉴别）、肝硬化分期等。
     • 弹性纤维染色 (如Verhoeff-Van Gieson法)： 弹性纤维（蓝黑/黑色）。用于观察血管壁（动脉硬化）、肺泡壁（肺气肿）及皮肤病变中的弹性纤维变化。
  2. 碳水化合物染色：
     • 过碘酸-雪夫反应 (PAS)： 显示糖原（肝、肌）、中性粘多糖、黏液、基底膜、真菌胞壁（红/紫红）。用于糖尿病肾病（肾小球基底膜增厚）、腺癌（细胞内黏液）、真菌感染诊断等。
     • 阿辛蓝染色 (AB)： 显示酸性粘多糖（硫酸粘蛋白、唾液酸粘蛋白，呈蓝色）。常与PAS联用（AB-PAS）区分中性（PAS+）和酸性（AB+）黏液。
  3. 微生物染色：
     • 抗酸染色 (如Ziehl-Neelsen法)： 结核分枝杆菌（红色）、麻风杆菌（红色）。抗酸杆菌诊断的金标准。
     • 革兰氏染色 (组织改良法)： 区分革兰氏阳性菌（蓝/紫）和革兰氏阴性菌（红）。快速筛查细菌。
     • 六胺银染色 (如Grocott法)： 真菌（黑色）、卡氏肺孢子菌（黑色或深褐色）。是真菌（尤其肺孢子菌）诊断的关键方法。
     • 吉姆萨染色/瑞氏-吉姆萨染色： 显示寄生虫（如利什曼原虫、弓形虫）、部分细菌（如幽门螺杆菌，需结合形态）及血细胞成分。
  4. 色素及无机物染色：
     • 普鲁士蓝反应： 检测三价铁离子（含铁血黄素，呈蓝色）。用于诊断含铁血黄素沉着症（如心衰细胞）、血色病、陈旧性出血。
     • 维多利亚蓝/罗丹宁染色： 检测铜（呈蓝绿色/红棕色）。用于Wilson病（肝豆状核变性）诊断。
     • 刚果红染色： 在偏振光下显示苹果绿色双折光的淀粉样物质（红）。淀粉样变性的诊断依据。
  5. 神经组织染色：
     • 尼氏染色 (如甲苯胺蓝、焦油紫)： 显示神经元尼氏体（蓝紫色）及核。观察神经元变性、坏死情况。
     • 神经纤维染色 (如Bielschowsky法)： 显示神经元轴突、树突（黑色）。观察神经纤维缠结等病变。
     • 髓鞘染色 (如Luxol Fast Blue)： 显示有髓神经纤维的髓鞘（蓝色）。用于脱髓鞘疾病研究。

• 核心价值：

  • 增强特定成分的可见性： 使在HE染色中模糊不清或无法区分的物质（如特定纤维、微生物）清晰显现。
  • 精确定性诊断： 提供重要的辅助诊断信息甚至是确诊依据（如抗酸杆菌、真菌、刚果红染色阳性的淀粉样变）。

HE染色与特殊染色的辩证关系

• 基础与补充： HE染色是常规诊断的起点和基础，提供了组织结构和基本病变的全貌。特殊染色是在HE染色发现疑问或需要明确特定目标时使用的有力补充和延伸。
• 广度与深度： HE染色提供全面概览，特殊染色则向特定方向深入挖掘。
• 协同诊断： 病理医生通常在仔细阅HE切片后，根据初步判断和鉴别诊断的需要，有目的地选择一种或多种特殊染色来验证假设、排除其他病变或确认诊断。

总结

HE染色赋予了组织学基本的形态框架，成为病理诊断的通用语言。而种类繁多的特殊染色则如同精密的“探针”，能够特异性地揭示隐藏在组织中的特定成分、微生物或病理变化，为解决诊断难题提供关键线索。两者相辅相成，共同构成了组织病理学不可或缺的技术支柱，为疾病的精准诊断、研究和理解奠定了坚实的形态学基础。随着免疫组织化学和分子病理学的飞速发展，特殊染色的应用场景虽有所缩减，但其在结缔组织病变、微生物鉴定、特定物质沉积（如铁、铜、淀粉样物）等方面的独特优势和简便高效性，使其在现代病理诊断中依然扮演着不可替代的重要角色。