以下是一篇关于抗氧化酶活性检测的完整技术文章，内容客观、专业，不包含任何企业或商品名称：
抗氧化酶活性检测方法综述 作者： 技术文献编辑部 日期： 2023年10月
一、引言
抗氧化酶是生物体内清除活性氧（ROS）、维持氧化还原平衡的关键物质，主要包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、谷胱甘肽还原酶（GR）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）等。准确测定其活性对于研究氧化应激、衰老、疾病机制及药物/植物提取物功效具有重要意义。本文系统综述常用抗氧化酶的检测原理与方法。
二、常用抗氧化酶检测原理与方法
1. 超氧化物歧化酶（SOD）
原理： SOD催化超氧阴离子（·O₂⁻）歧化为H₂O₂和O₂。常用检测法基于抑制型反应：
- 氮蓝四唑（NBT）光还原抑制法：核黄素光照产生·O₂⁻，将NBT还原为蓝紫色甲䐶；SOD抑制该反应，抑制率与酶活性正相关。
步骤：
- 制备待测样品（组织匀浆或细胞裂解液）；
- 反应体系含：50mM磷酸缓冲液（pH 7.8）、13mM甲硫氨酸、75μM NBT、0.1mM EDTA、2μM核黄素；
- 加入样品，避光对照管用锡箔包裹；
- 4000lux光照20分钟；
- 560nm测定吸光度；
- 计算抑制率： 抑制率(%)=�对照−�样品�对照×100抑制率(%)=A对照A对照−A样品×100
- 酶活性单位：抑制率达50%时定义为1个活力单位（U）。
2. 过氧化氢酶（CAT）
原理： CAT催化H₂O₂分解为H₂O和O₂。通过测定单位时间内H₂O₂减少量计算活性。
步骤：
- 样品制备：组织匀浆于50mM磷酸缓冲液（pH 7.0）；
- 反应体系：2mL 50mM H₂O₂（现配） + 0.1mL样品；
- 立即计时，240nm测定1分钟内吸光度下降速率（ΔA/min）；
- 酶活性计算： CAT活性(U/mg prot)=Δ�240/min×�总0.0436×�蛋白CAT活性(U/mg prot)=0.0436×m蛋白ΔA240/min×V总 注：0.0436为H₂O₂摩尔消光系数（cm²/μmol），V_总为体系体积（mL），m_蛋白为蛋白质量（mg）
3. 过氧化物酶（POD）
原理： POD催化H₂O₂氧化特定底物（如愈创木酚），生成有色产物。
步骤（愈创木酚法）：
- 反应体系：100mM磷酸缓冲液（pH 6.0）2mL + 0.1mL 1% H₂O₂ + 0.1mL 50mM愈创木酚；
- 加入0.1mL样品，混匀；
- 470nm监测3分钟吸光度上升速率（ΔA/min）；
- 酶活性计算： POD活性(U/g)=Δ�470/min×�总�×�×�样品×1000POD活性(U/g)=ε×d×m样品ΔA470/min×V总×1000 ε：四邻甲氧基连酚消光系数（26.6 mM⁻¹cm⁻¹）
4. 谷胱甘肽还原酶（GR）
原理： GR催化氧化型谷胱甘肽（GSSG）还原为GSH，同时NADPH氧化为NADP⁺，340nm吸光度下降速率反映酶活性。
步骤：
- 反应体系：100mM磷酸缓冲液（pH 7.8）、1mM EDTA、1mM GSSG、0.1mM NADPH；
- 加入样品，25℃孵育；
- 340nm监测3分钟吸光度变化（ΔA/min）；
- 酶活性计算： GR活性=Δ�340/min×�总6.22×�×�蛋白GR活性=6.22×d×m蛋白ΔA340/min×V总 6.22：NADPH毫摩尔消光系数（cm²/μmol）
三、关键注意事项
- 样品制备：
- 使用预冷的提取缓冲液（含PVP或EDTA）；
- 避免反复冻融，4℃或液氮保存。
- 反应条件：
- 严格控制温度、pH及光照（SOD检测）；
- 设置空白对照和样品对照（如灭活酶）。
- 数据标准化：
- 酶活性需以单位质量蛋白（Bradford/Lowry法测定）或单位组织鲜重表示。
- 干扰控制：
- 避免使用金属离子螯合剂（干扰SOD）；
- H₂O₂溶液需新鲜配制并标定浓度。
四、结论
抗氧化酶活性检测是评估生物体抗氧化能力的关键技术。不同酶需选用适配的检测体系，严谨的操作流程与标准化数据表达可确保结果可靠性。研究者应根据实验目的（如植物抗逆性、动物疾病模型）选择核心酶谱组合分析，全面评价氧化应激状态。
参考文献（示例格式，非真实文献）：
- Beauchamp C. et al. (1971) Anal Biochem.
- Aebi H. (1984) Methods Enzymol.
- Nakano Y. et al. (1981) Plant Cell Physiol.
本文内容基于公开的生化检测原理编写，未涉及商业产品信息，适用于科研与教学参考。