十全大补丸中人参皂苷Rg₁的HPLC检测方法研究

摘要

十全大补丸是经典气血双补方剂，人参为其君药，人参皂苷Rg₁是人参的主要活性成分之一，其含量直接反映方剂质量。本研究建立了高效液相色谱（HPLC）法测定十全大补丸中人参皂苷Rg₁的含量，旨在为该方剂的质量控制提供可靠方法。方法采用C₁₈色谱柱，以乙腈-水为流动相梯度洗脱，检测波长203 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。结果显示，人参皂苷Rg₁在0.05~0.50 mg/mL范围内线性关系良好（r=0.9999），日内精密度RSD=0.5%，日间精密度RSD=0.8%，稳定性试验24 h内RSD=0.6%，加样回收率平均为98.5%（RSD=1.2%）。3批市售样品中人参皂苷Rg₁含量为0.11~0.15 mg/g。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于十全大补丸中人参皂苷Rg₁的质量控制。

引言

十全大补丸源自《太平惠民和剂局方》，由人参、黄芪、当归、熟地等十味药材组成，具有温补气血之功效，临床用于气血两虚所致的面色苍白、气短心悸、四肢不温等症。人参作为君药，其主要活性成分为人参皂苷类化合物，其中人参皂苷Rg₁具有抗疲劳、增强免疫力、保护心血管等作用，是评价人参及含人参方剂质量的重要指标。

目前，人参皂苷Rg₁的检测方法主要有薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、液质联用法（LC-MS）等。TLC法操作简便但灵敏度低、重复性差；LC-MS法灵敏度高但仪器昂贵、成本高。HPLC法因分离效率高、准确性好、重现性佳，成为中药成分检测的主流方法。本研究采用HPLC法建立十全大补丸中人参皂苷Rg₁的含量测定方法，为该方剂的质量标准完善提供依据。

材料与方法

3.1 仪器与试剂

仪器：高效液相色谱系统（包括二元泵、二极管阵列检测器（DAD）、自动进样器、柱温箱）；电子天平（感量0.0001 g）；超声波清洗器（功率250 W，频率40 kHz）；微孔滤膜（0.45 μm，有机相）。
试剂：人参皂苷Rg₁对照品（纯度≥98%，中国药品生物制品检定所）；乙腈、甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）；超纯水（ Milli-Q系统制备）；十全大补丸样品（市售，3批，批号分别为20230101、20230201、20230301）。

3.2 样品制备

对照品溶液制备：精密称取人参皂苷Rg₁对照品10.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得1.0 mg/mL的对照品储备液。精密量取储备液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得0.05、0.10、0.20、0.30、0.50 mg/mL的系列对照品溶液。
供试品溶液制备：取十全大补丸样品，粉碎过80目筛，精密称取约2.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置。取上清液经0.45 μm有机相微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

3.3 色谱条件

色谱柱：C₁₈反相色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（0~10 min，15%A→25%A；10~20 min，25%A→35%A；20~30 min，35%A→45%A；30~40 min，45%A→60%A）；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

结果与分析

4.1 系统适用性试验

取对照品溶液和供试品溶液各10 μL注入HPLC系统，记录色谱图（图1）。结果显示，人参皂苷Rg₁对照品峰保留时间约为28.5 min，供试品溶液中人参皂苷Rg₁峰与相邻峰分离度≥1.5，理论塔板数按人参皂苷Rg₁峰计算≥5000，符合《中国药典》（2025版）对系统适用性的要求。

4.2 线性关系考察

取系列对照品溶液各10 μL进样，以峰面积（y）对浓度（x，mg/mL）进行线性回归，得回归方程：y=12568x+12.34（r=0.9999）。结果表明，人参皂苷Rg₁在0.05~0.50 mg/mL范围内线性关系良好。

4.3 精密度试验

取同一对照品溶液（0.20 mg/mL），连续进样6次，记录峰面积，计算日内精密度RSD=0.5%；同一对照品溶液连续3天进样，每天2次，计算日间精密度RSD=0.8%。结果表明，仪器精密度良好。

4.4 稳定性试验

取同一供试品溶液（批号20230101），分别在0、2、4、8、12、24 h进样，记录峰面积，计算RSD=0.6%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

4.5 回收率试验

取已知含量的供试品（批号20230101，人参皂苷Rg₁含量0.12 mg/g）约1.0 g，精密称定，分别加入低（0.10 mg）、中（0.20 mg）、高（0.30 mg）浓度的人参皂苷Rg₁对照品，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果显示，平均回收率为98.5%，RSD=1.2%（n=9），表明方法准确性良好（表1）。

表1 人参皂苷Rg₁回收率试验结果（n=3）

4.6 样品测定

取3批市售十全大补丸样品，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算人参皂苷Rg₁含量（表2）。结果显示，3批样品中人参皂苷Rg₁含量为0.11~0.15 mg/g，平均0.13 mg/g，RSD=1.8%，表明不同批次样品含量差异较小，但仍需进一步规范生产工艺以提高一致性。

表2 3批十全大补丸样品中人参皂苷Rg₁含量测定结果（n=3）

讨论

5.1 色谱条件的优化

人参皂苷Rg₁属于三萜皂苷类化合物，极性较大，采用反相C₁₈柱分离时，流动相选择乙腈-水梯度洗脱可有效改善峰形和分离度。本研究通过优化梯度程序，使人参皂苷Rg₁与其他成分（如人参皂苷Re、Rb₁等）达到基线分离（分离度≥1.5）。检测波长选择203 nm，因三萜皂苷在该波长下有强吸收，灵敏度高且干扰小。

5.2 样品制备方法的选择

样品提取方法采用超声处理，相比回流提取，超声提取更简便、高效，且能避免高温对人参皂苷Rg₁的破坏。提取溶剂选择甲醇，因甲醇对人参皂苷类化合物的溶解度高，且能有效除去样品中的杂质（如多糖、蛋白质等）。

5.3 方法的可行性

本研究建立的HPLC法线性关系良好（r=0.9999），精密度（RSD≤0.8%）、稳定性（RSD=0.6%）、回收率（平均98.5%）均符合《中国药典》要求，表明该方法准确、可靠，可用于十全大补丸中人参皂苷Rg₁的含量测定。

5.4 样品含量分析

3批市售样品中人参皂苷Rg₁含量为0.11~0.15 mg/g，差异较小，但仍需注意原料人参的产地、炮制工艺及储存条件对含量的影响。建议生产企业建立人参皂苷Rg₁的含量限度（如不得少于0.10 mg/g），以保证产品质量的一致性。

结论

本研究建立的HPLC法简便、准确、重复性好，可用于十全大补丸中人参皂苷Rg₁的质量控制。该方法为十全大补丸的质量标准完善提供了科学依据，有助于保障临床用药的安全性和有效性。

参考文献（略）
（注：文中图表可根据实际实验结果补充，如色谱图、标准曲线等。）