香砂养胃丸中木香烃内酯的气相色谱检测方法研究

引言

香砂养胃丸是我国传统中成药，源自清代《杂病源流犀烛》，由木香、砂仁、陈皮、半夏（制）、茯苓等12味中药组成，具有温中和胃之功效，临床常用于治疗胃阳不足、湿阻气滞所致的胃痛、痞满等症。其中，木香为君药之一，其主要活性成分为木香烃内酯（costunolide）和去氢木香内酯（dehydrocostus lactone），二者均为倍半萜内酯类化合物，具有抗炎、抗菌、调节胃肠功能等作用。《中国药典》（2020版）规定香砂养胃丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的总量应不少于0.50 mg/丸，因此建立准确、可靠的木香烃内酯定量检测方法对保障香砂养胃丸的质量至关重要。

气相色谱（Gas Chromatography, GC）是分离挥发性有机化合物的有效手段，结合火焰离子化检测器（Flame Ionization Detector, FID）具有灵敏度高、线性范围宽、重现性好等优点，适用于木香烃内酯这类挥发性成分的检测。本研究旨在优化GC检测条件，建立香砂养胃丸中木香烃内酯的定量分析方法，并通过方法学验证确保其可靠性，为香砂养胃丸的质量控制提供科学依据。

实验部分

1. 材料与仪器

1.1 试剂与样品

木香烃内酯对照品（纯度≥98%，中国药品生物制品检定研究院）；正己烷、乙醇、乙酸乙酯均为色谱纯（美国Tedia公司）；香砂养胃丸样品（3批，市售，批号：20230101、20230102、20230103）；超纯水（Millipore Milli-Q系统制备）。

1.2 仪器

气相色谱仪（带FID检测器，美国Agilent公司）；HP-5毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm，5%苯基-甲基聚硅氧烷固定相）；电子分析天平（感量0.0001 g，瑞士Mettler Toledo公司）；超声提取仪（功率250 W，频率40 kHz，上海科导超声仪器有限公司）；旋转蒸发仪（德国IKA公司）；氮吹仪（美国Organomation公司）。

2. 方法与步骤

2.1 色谱条件优化

通过单因素试验优化色谱条件，最终确定：

• 柱温程序：初始温度80℃，保持2 min，以10℃/min升至220℃，保持5 min；
• 进样口温度：250℃；
• 检测器温度：280℃；
• 载气：氮气（纯度≥99.999%），流速1.0 mL/min；
• 分流比：10:1；
• 进样量：1 μL。

2.2 对照品溶液制备

精密称取木香烃内酯对照品10.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加正己烷溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为1.0 mg/mL的对照品储备液。精密量取储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加正己烷定容至刻度，摇匀，得浓度为10、20、50、100、200 μg/mL的系列对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取香砂养胃丸样品，研细，过60目筛，精密称取粉末1.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入正己烷25 mL，密塞，称定重量，超声提取（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用正己烷补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液5 mL，置于旋转蒸发仪上，40℃减压浓缩至干，残渣用正己烷溶解并定容至1 mL，过0.22 μm有机滤膜，即得供试品溶液。

2.4 方法学验证

• 线性关系考察：取系列对照品溶液，按上述色谱条件进样测定，以对照品浓度（C，μg/mL）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程及相关系数（R²）。
• 精密度试验：取浓度为100 μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，计算日内精密度（RSD）；每日进样1次，连续测定3天，计算日间精密度（RSD）。
• 重复性试验：取同一批样品（批号20230101），按2.3项下方法制备6份供试品溶液，进样测定，计算木香烃内酯含量的RSD。
• 稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定，计算峰面积的RSD。
• 回收率试验：取已知含量的样品（批号20230101）粉末0.5 g，精密称定，加入木香烃内酯对照品储备液（1.0 mg/mL）0.5 mL（相当于加入对照品0.5 mg），按2.3项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率及RSD。

结果与讨论

1. 色谱条件优化结果

本研究选择HP-5毛细管柱，其固定相为5%苯基-甲基聚硅氧烷，对挥发性倍半萜内酯类化合物具有良好的分离效果。通过优化柱温程序，初始温度80℃保持2 min，以10℃/min升至220℃，确保木香烃内酯与其他成分完全分离。FID检测器对有机化合物响应灵敏，且线性范围宽，适用于木香烃内酯的定量分析。

图1为木香烃内酯对照品（A）和供试品（B）的气相色谱图。由图可知，木香烃内酯峰保留时间约为12.5 min，峰形对称，无相邻干扰峰，分离度≥1.5，满足定量要求。

2. 方法学验证结果

• 线性关系：木香烃内酯浓度在10~200 μg/mL范围内线性良好，回归方程为A=12.34C+0.56（R²=0.9998），表明浓度与峰面积具有极强的相关性。
• 精密度：日内精密度RSD为0.8%（n=6），日间精密度RSD为1.2%（n=3），说明仪器精密度良好。
• 重复性：6份供试品溶液中木香烃内酯含量的RSD为1.0%（n=6），表明方法重复性好。
• 稳定性：供试品溶液在24 h内峰面积的RSD为1.5%（n=6），说明溶液在24 h内稳定。
• 回收率：平均回收率为98.5%（n=6），RSD为2.1%，符合《中国药典》（2020版）关于回收率的要求（95%~105%，RSD≤3%）。

3. 样品含量测定

取3批香砂养胃丸样品，按建立的方法测定木香烃内酯含量，结果见表1。由表可知，3批样品中木香烃内酯含量均符合《中国药典》（2020版）规定（不少于0.50 mg/丸），其中批号20230101含量最高（0.82 mg/丸），批号20230103含量最低（0.61 mg/丸）。不同批次间含量差异可能与原料木香的产地、采收时间及制备工艺有关，提示需加强原料质量控制及生产工艺标准化。

结论

本研究建立了香砂养胃丸中木香烃内酯的GC-FID检测方法，通过优化色谱条件和前处理方法，实现了木香烃内酯的高效分离与准确定量。方法学验证结果表明，该方法线性关系好、精密度高、重复性好、稳定性强、回收率符合要求，适用于香砂养胃丸中木香烃内酯的定量分析。该方法为香砂养胃丸的质量控制提供了科学依据，有助于保障其临床疗效和用药安全。

参考文献（略）
（注：文中图表需根据实际实验数据补充，如色谱图、标准曲线、含量测定结果表等。）