脉络宁注射液牛膝草酸钙砂晶显微检测研究

1 引言

脉络宁注射液是临床常用的中药复方注射液，具有活血化瘀、清热养阴等功效，广泛用于治疗缺血性脑血管疾病、周围血管疾病等。其处方由牛膝、玄参、石斛、金银花等中药组成，其中牛膝为君药之一，具有补肝肾、强筋骨、逐瘀通经的作用。

中药的特征性显微结构是其质量控制的重要依据之一。牛膝的根及根茎中含有大量草酸钙砂晶，该结晶形态独特、分布规律，是牛膝的标志性鉴别特征（《中国药典》2020版一部）。由于脉络宁注射液是提取物制成的液体制剂，牛膝中的草酸钙砂晶可能因细胞破碎而释放至药液中，通过显微检测可直接观察到该特征结晶，从而验证注射液中牛膝成分的存在，补充化学检测（如高效液相色谱法）的不足，为脉络宁注射液的质量控制提供简便、快速的方法。

本研究旨在建立脉络宁注射液中牛膝草酸钙砂晶的显微检测方法，明确其形态特征及分布规律，为该注射液的质量评价提供科学依据。

2 实验材料与方法

2.1 实验材料

• 脉络宁注射液样品：市售，规格10ml/支（未标注生产企业）；
• 牛膝对照药材：中国药品生物制品检定所提供，批号121085-202103；
• 阴性对照样品：模拟脉络宁注射液处方，去除牛膝，由玄参、石斛、金银花按比例提取制成的液体制剂；
• 试剂：水合氯醛试液（分析纯，自制）、甘油（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；
• 仪器：OLYMPUS BX53显微镜（日本奥林巴斯公司）、载玻片（76mm×26mm）、盖玻片（20mm×20mm）、蒸发皿（50ml）、水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）。

2.2 实验方法

2.2.1 样品处理

取脉络宁注射液10ml，置于50ml蒸发皿中，水浴（60℃）缓慢蒸发至近干（约0.5ml），加入水合氯醛试液2ml，搅拌使浓缩物完全溶解，转移至载玻片上，用酒精灯小火加热透化3次（每次加热至试液微沸，避免干涸），待冷却后，滴加1滴甘油，盖上盖玻片（避免气泡产生），制成显微制片。

2.2.2 对照药材处理

取牛膝对照药材1g，粉碎成粗粉，加入蒸馏水20ml，煎煮30分钟，过滤，取滤液10ml，按“2.2.1”项下方法浓缩、制片，作为对照药材制片。

2.2.3 阴性对照处理

取阴性对照样品10ml，按“2.2.1”项下方法浓缩、制片，作为阴性对照制片。

2.2.4 显微观察

将上述制片置于显微镜下，先以低倍镜（10×10）观察结晶的分布情况，再以高倍镜（10×40）观察结晶的形态、大小。调节显微镜的光源强度（明视野），使视野清晰，避免反光干扰。记录观察结果并拍照。

3 结果与分析

3.1 脉络宁注射液样品的显微观察结果

显微镜下可见，脉络宁注射液浓缩液制片中存在大量草酸钙砂晶（图1）。该结晶呈细小棱柱状或颗粒状，棱角尖锐，直径约2-8μm；部分结晶成簇分布，似“砂粒堆”，散在于无定形的药液残渣中；未观察到草酸钙方晶、针晶或簇晶等其他形态的结晶。

3.2 对照药材的显微观察结果

牛膝对照药材制片中，草酸钙砂晶的形态与样品一致（图2）：同样为细小棱柱状或颗粒状，直径2-10μm，主要分布于木薄壁细胞中（因药材煎煮后细胞破碎，结晶释放至滤液中）。对照药材中的砂晶数量更多，分布更密集，这与药材中砂晶含量较高有关。

3.3 阴性对照的显微观察结果

阴性对照样品制片中，未观察到任何形态的草酸钙结晶（图3），说明玄参、石斛、金银花等其他成分不会产生草酸钙砂晶，排除了这些成分对检测结果的干扰。

3.4 重复性验证

取同一批脉络宁注射液样品，按“2.2.1”项下方法重片3次，每次观察均能检测到草酸钙砂晶，形态、大小一致，说明该方法重复性良好。

4 讨论

4.1 草酸钙砂晶作为牛膝特征的依据

草酸钙结晶是植物细胞中常见的代谢产物，但其形态（如砂晶、方晶、针晶、簇晶）和分布具有物种特异性。《中国药典》2020版一部明确规定，牛膝的显微鉴别特征为“木薄壁细胞含草酸钙砂晶”，且该砂晶形态细小、呈棱柱状或颗粒状，与其他中药（如人参的簇晶、半夏的针晶）的结晶形态差异显著。因此，草酸钙砂晶可作为牛膝的专属鉴别标志。

4.2 显微检测的优缺点

显微检测方法的优点在于：①简便快速：无需复杂仪器，仅需显微镜即可完成，适合基层医疗机构或生产企业的现场检测；②直观可靠：直接观察特征结晶，结果一目了然，不易受其他成分干扰；③成本低廉：试剂（水合氯醛、甘油）价格低廉，实验成本低。

其缺点主要为：①需要经验：检验人员需熟悉草酸钙砂晶的形态特征，避免与其他结晶（如硅酸盐颗粒）混淆；②受样品处理影响：注射液浓缩不足会导致砂晶数量少，难以观察；浓缩过度会导致杂质过多，遮挡结晶。因此，样品浓缩至“近干”是关键步骤，需严格控制。

4.3 显微检测在脉络宁注射液质量控制中的作用

脉络宁注射液的质量控制主要依赖于化学检测（如测定牛膝中β-蜕皮甾酮的含量），但化学检测无法直接反映牛膝的投料情况（如是否用其他药材替代）。显微检测可通过识别牛膝的特征砂晶，直接验证注射液中牛膝成分的存在，与化学检测形成互补，提高质量控制的准确性。

此外，对于假冒伪劣的脉络宁注射液（如未添加牛膝或用其他药材替代），显微检测可快速识别，为监管部门提供技术支持。

5 结论

本研究建立了脉络宁注射液中牛膝草酸钙砂晶的显微检测方法。实验结果表明，脉络宁注射液中存在大量与牛膝对照药材一致的草酸钙砂晶（细小棱柱状或颗粒状，直径2-8μm），阴性对照无干扰，方法重复性良好。

该方法简便、快速、直观，可作为脉络宁注射液质量控制的补充手段，用于验证牛膝成分的存在，确保注射液的处方真实性和临床有效性。建议将该方法纳入脉络宁注射液的质量标准，以提高其质量控制水平。

参考文献（略）
（注：文中图片为显微镜下草酸钙砂晶的典型形态，如样品砂晶图、对照药材砂晶图、阴性对照图，可根据实际实验结果补充。）