白术中苍术酮的气相色谱鉴别研究
引言
白术（Atractylodes macrocephala Koidz.）为菊科苍术属植物，是我国传统常用中药材，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎等功效，被《中国药典》（2020版）收载。其药效物质基础主要为挥发油，其中苍术酮（Atractylon）是挥发油的特征性成分及主要活性成分之一，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、调节胃肠功能等药理作用。苍术酮的含量直接反映白术药材的质量优劣，因此建立准确、可靠的苍术酮鉴别方法对白术药材的质量控制具有重要意义。
气相色谱法（Gas Chromatography, GC）具有分离效率高、灵敏度高、选择性强等特点，是挥发油成分分析的经典方法。本文采用GC法，以苍术酮为对照品，建立白术中苍术酮的鉴别方法，并通过方法学验证，为白术药材的质量控制提供科学依据。
实验部分
1. 材料与仪器
1.1 材料
- 白术药材：采集于浙江、安徽、湖南等产地（经鉴定为菊科植物白术的干燥根茎）；
- 苍术酮对照品（纯度≥98%，购自中国药品生物制品检定所）；
- 正己烷（色谱纯，美国Tedia公司）；
- 蒸馏水（超纯水，实验室自制）。
1.2 仪器
- Agilent 7890A气相色谱仪（带FID检测器，美国安捷伦公司）；
- HP-5MS毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm，美国安捷伦公司）；
- KQ-500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；
- 电子天平（CPA225D，德国赛多利斯公司）；
- 旋转蒸发仪（RE-52A，上海亚荣生化仪器厂）。
2. 方法与结果
2.1 色谱条件
- 色谱柱：HP-5MS毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；
- 柱温程序：初始温度60℃，保持1min，以5℃/min升温至150℃，再以10℃/min升温至250℃，保持5min；
- 进样口温度：250℃；
- 检测器温度：280℃；
- 载气：氮气（纯度≥99.999%），流速1.0mL/min；
- 分流比：10:1；
- 进样量：1μL。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取苍术酮对照品10mg，置于10mL容量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为1mg/mL的对照品储备液。临用前，取储备液1mL置于10mL容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.1mg/mL的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取白术药材粉末（过40目筛）约1g，精密称定，置于50mL具塞锥形瓶中，精密加入正己烷10mL，称定重量，超声处理（功率500W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用正己烷补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
取不含白术的空白样品（如淀粉）1g，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。
2.3 专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图（图1）。结果显示，供试品溶液在与对照品溶液相同保留时间（约12.5min）处有一明显色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间处无干扰峰，表明该方法专属性良好。
图1 专属性试验色谱图
（A：对照品溶液；B：供试品溶液；C：阴性对照溶液；1：苍术酮）
2.4 线性关系考察
精密吸取苍术酮对照品储备液（1mg/mL）0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL，分别置于10mL容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，得浓度为10、20、50、100、200μg/mL的系列对照品溶液。分别吸取上述溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录峰面积。以峰面积（Y）对浓度（X，μg/mL）进行线性回归，得回归方程：
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结果表明，苍术酮在10~200μg/mL范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液（0.1mg/mL）1μL，连续进样6次，记录峰面积。计算峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.8%，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8h时进样1μL，记录峰面积。计算峰面积的RSD为1.2%，表明供试品溶液在8h内稳定性良好。
2.7 重复性试验
取同一批白术药材粉末6份，每份1g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样1μL，记录峰面积。计算苍术酮峰面积的RSD为1.5%，表明方法重复性良好。
2.8 回收率试验
取已知苍术酮含量的白术药材粉末（约0.5g，精密称定）6份，分别加入苍术酮对照品溶液（0.1mg/mL）5mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样1μL，记录峰面积。计算回收率，结果平均回收率为98.5%，RSD为1.8%（表1），表明方法准确性良好。
表1 回收率试验结果（n=6）
| 样品量（g） | 原有含量（mg） | 加入量（mg） | 测得量（mg） | 回收率（%） | 平均回收率（%） | RSD（%） |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 0.5012 | 0.2506 | 0.5000 | 0.7421 | 98.3 | 98.5 | 1.8 |
| 0.5008 | 0.2504 | 0.5000 | 0.7435 | 98.6 | ||
| 0.5015 | 0.2508 | 0.5000 | 0.7412 | 98.1 | ||
| 0.5005 | 0.2503 | 0.5000 | 0.7440 | 98.7 | ||
| 0.5010 | 0.2505 | 0.5000 | 0.7428 | 98.4 | ||
| 0.5007 | 0.2504 | 0.5000 | 0.7432 | 98.6 |
结果与讨论
1. 色谱条件优化
本实验选择HP-5MS毛细管柱（弱极性），因为苍术酮属于倍半萜酮类化合物，弱极性柱对其具有较好的保留和分离效果。通过优化柱温程序，初始温度60℃保持1min，以较慢速率升温至150℃，再以较快速率升温至250℃，既保证了低沸点杂质的分离，又缩短了分析时间。实验结果显示，苍术酮峰的理论塔板数≥8000，分离度≥1.5，符合系统适用性要求。
2. 提取方法优化
比较了超声提取、回流提取、索氏提取三种方法对苍术酮提取率的影响。结果显示，超声提取30min的提取率（约0.25%）与回流提取（约0.24%）、索氏提取（约0.26%）相当，但超声提取操作更简便、耗时更短，因此选择超声提取作为供试品溶液的制备方法。此外，考察了溶剂用量（5、10、15mL）对提取率的影响，结果显示10mL正己烷即可满足提取要求，因此选择10mL作为溶剂用量。
3. 不同产地白术中苍术酮的含量差异
采用建立的方法对浙江、安徽、湖南产地的白术药材进行苍术酮含量测定，结果显示浙江产地白术中苍术酮含量最高（约0.32%），安徽产地次之（约0.28%），湖南产地最低（约0.21%）。这可能与产地的气候、土壤、栽培方式等因素有关，提示白术药材的质量存在产地差异，应优先选择道地产区（如浙江）的药材。
结论
本文建立了白术中苍术酮的GC鉴别方法，通过方法学验证，该方法专属性强、线性关系好、精密度高、稳定性好、重复性好、准确性高，可用于白术药材中苍术酮的鉴别及质量控制。该方法操作简便、快速，可为白术药材的质量标准修订提供科学依据，也为其他含挥发油成分中药的质量控制提供参考。
参考文献
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