腺嘌呤诱导慢性肾功能不全(大鼠)

腺嘌呤诱导大鼠慢性肾功能不全模型的建立及检测项目分析

一、引言

慢性肾功能不全（Chronic Renal Failure, CRF）是多种肾脏疾病发展的终末阶段，以肾小球滤过率下降、氮质血症、电解质紊乱和肾组织结构破坏为主要特征。腺嘌呤（Adenine）因其在体内代谢产生难溶性物质2,8-二羟基腺嘌呤（2,8-DHA），在肾小管内沉积并引发肾小管间质炎症和纤维化，被广泛用于建立大鼠慢性肾功能不全模型。该模型稳定、重复性好，是研究慢性肾病发病机制及药物干预的常用模型。

二、模型建立方法

• 动物选择：成年SD或Wistar大鼠，体重180–220 g
• 造模剂：腺嘌呤（纯度≥98%）
• 给药方式：灌胃或混入饲料
• 剂量：150–300 mg/kg/d，持续14–28天
• 对照组：给予等体积溶剂（如0.5%羧甲基纤维素钠溶液）

三、检测项目（重点）

为全面评估模型是否成功建立及肾功能损伤程度，需进行以下检测：

1. 一般状态观察

• 体重变化
• 摄食量、饮水量
• 精神状态、活动度
• 尿量变化（多尿或少尿）

2. 血液生化检测

3. 尿液检测

• 24小时尿蛋白定量（考马斯亮蓝法/双缩脲法）
• 尿肌酐（Ucr） → 计算肌酐清除率（Ccr）： Ccr (mL/min)=尿肌酐×尿量血肌酐×1440Ccr(mL/min)=血肌酐×1440尿肌酐×尿量​
• 尿NAG酶：肾小管损伤标志物
• 尿β2-微球蛋白：近端肾小管功能损伤指标

4. 肾脏组织病理学检测

• HE染色：观察肾小球硬化、肾小管扩张/萎缩、间质炎症细胞浸润
• PAS染色：显示基底膜增厚、系膜基质增生
• Masson三色染色：胶原纤维沉积（蓝色），评估肾纤维化程度
• Sirius Red染色：定量分析Ⅰ/Ⅲ型胶原表达
• 免疫组化/免疫荧光：
  • α-SMA（肌成纤维细胞活化）
  • TGF-β1（促纤维化因子）
  • NF-κB（炎症通路激活）
  • Caspase-3（细胞凋亡）

5. 分子生物学检测

• qRT-PCR：
  • 纤维化基因：Col1a1, Col3a1, Fibronectin, α-SMA
  • 炎症因子：TNF-α, IL-6, IL-1β
  • 氧化应激：SOD2, GPx1, HO-1
• Western Blot：
  • TGF-β/Smad通路蛋白（Smad2/3, p-Smad）
  • NF-κB通路（p65, IκBα）
  • 凋亡相关（Bax/Bcl-2, Cleaved Caspase-3）

6. 氧化应激指标

• MDA（丙二醛）：脂质过氧化产物
• SOD（超氧化物歧化酶）：抗氧化酶活性
• GSH（谷胱甘肽）：还原型抗氧化物质

7. 肾功能影像学（可选）

• 肾脏超声：观察肾脏大小、皮质回声增强
• Micro-CT：三维重建肾脏结构（需造影剂）

四、模型成功标准

1. 生化指标：Scr ≥ 80 μmol/L，BUN ≥ 20 mmol/L（较对照组升高2倍以上）
2. 病理特征：肾小管广泛结晶沉积、间质纤维化评分 ≥ 2级
3. 尿蛋白：显著升高（>30 mg/24h）

五、注意事项

• 腺嘌呤毒性：剂量过高可致急性肾损伤甚至死亡，需预实验确定最佳剂量。
• 结晶沉积：肾组织切片中可见针状2,8-DHA结晶（偏振光下双折光性）。
• 时间窗：纤维化在给药后3–4周最明显，需合理设计取材时间点。

六、应用方向

• 慢性肾病发病机制研究（炎症、纤维化、氧化应激）
• 药物筛选（ACEI/ARB、抗纤维化中药、抗氧化剂等）
• 肾脏保护剂药效学评价

七、结论

腺嘌呤诱导的大鼠CRF模型通过多维度检测（生化、尿液、病理、分子），可全面模拟人类慢性肾病的病理生理过程。重点关注血肌酐、BUN、肾组织纤维化评分及炎症因子表达，为研究提供可靠的技术平台。

参考文献（示例）：

1. Yokozawa T., et al. Nephron. 1986.
2. Ali B.H., et al. Toxicology. 2013.
3. 张明, 等. 腺嘌呤致慢性肾衰模型的研究进展. 《中国药理学通报》. 2020.

如需具体实验操作流程或检测试剂盒货号，可进一步补充说明！