腺嘌呤+乙胺丁醇诱导大鼠高尿酸血症模型的建立及检测
一、实验目的
建立稳定的大鼠高尿酸血症模型，评估腺嘌呤与乙胺丁醇联用对尿酸代谢的影响。
二、主要检测项目
1. 血清生化指标
- 核心指标：
- 血尿酸（SUA）：酶比色法（尿酸酶法），模型成功的关键指标。
- 肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）：评估肾功能损伤。
- 黄嘌呤氧化酶（XOD）活性：尿酸生成关键酶。
- 辅助指标：
- 肝功能：ALT、AST（排除药物肝毒性干扰）。
- 血脂：TG、TC（代谢综合征关联指标）。
2. 尿液检测
- 24小时尿尿酸排泄量：代谢笼收集尿液，评估肾脏排泄功能。
- 尿肌酐：计算尿酸排泄分数（FEUA）=（尿尿酸×血肌酐）/（血尿酸×尿肌酐）。
3. 肾脏病理学检查
- HE染色：观察肾小管结晶沉积、炎性浸润、纤维化。
- Masson染色：评估胶原纤维沉积程度。
- 免疫组化：
- URAT1（尿酸重吸收转运体）、GLUT9：检测肾小管尿酸转运蛋白表达。
- TLR4/NF-κB：炎症通路相关蛋白。
4. 分子生物学检测
- qPCR/Western Blot：
- 肾脏组织中XOD、ADA（腺苷脱氨酶）mRNA及蛋白表达。
- 炎症因子（IL-1β、TNF-α）表达水平。
5. 肠道菌群分析（可选）
- 16S rRNA测序：评估乙胺丁醇对肠道尿酸分解菌（如副拟杆菌）的影响。
三、实验流程
-
模型建立
- 分组：空白对照组、腺嘌呤组（100-300 mg/kg/d）、乙胺丁醇组（250 mg/kg/d）、联合用药组。
- 给药周期：14-28天（腺嘌呤灌胃，乙胺丁醇可混饲或灌胃）。
-
样本采集
- 血液：末次给药后禁食12小时，眼眶取血分离血清。
- 尿液：代谢笼收集24小时尿液。
- 肾脏：取左肾固定于4%多聚甲醛，右肾-80℃保存。
-
检测时间点
- 动态监测：第0、7、14、21、28天检测血尿酸及肾功能（根据预实验调整）。
四、模型验证标准
- 成功标志：
- 联合用药组血尿酸显著升高（较对照组升高≥50%）。
- 伴随Scr、BUN升高及肾脏病理损伤。
- XOD活性及URAT1表达上调。
五、注意事项
- 剂量优化：腺嘌呤可能引起急性肾损伤，需预实验确定最低有效剂量。
- 对照设置：建议增加别嘌醇或苯溴马隆干预组作为阳性对照。
- 检测标准化：尿酸易受温度影响，样本需立即分离血清并避光保存。
六、参考文献
- 腺嘌呤诱导高尿酸血症伴肾损伤模型的建立（《中国药理学通报》2020）
- 乙胺丁醇抑制肠道尿酸分解的机制（《PLoS One》2018）
如需具体检测方法细节（如试剂盒货号、操作步骤）或某部分扩展说明，可进一步补充！