小鼠肺腺癌LA795绿色荧光标记细胞BTT739小鼠肿瘤模型

发布时间：2026-04-16 阅读量：13 作者：生物检测中心

小鼠肺腺癌LA795细胞绿色荧光标记模型构建与应用研究

摘要：
本研究成功构建了基于T739近交系小鼠的可移植性肺腺癌模型。该模型采用绿色荧光蛋白标记的小鼠肺腺癌细胞系LA795，通过稳定转染技术实现高效标记，并在T739小鼠体内建立皮下或原位移植瘤。该模型具备肿瘤生长可视化、可定量监测及组织病理学特征明确等优势，为肺腺癌发生发展机制、抗肿瘤药物筛选及肿瘤微环境研究提供了重要的实验平台。

关键词： 肺腺癌；LA795细胞；绿色荧光蛋白；T739小鼠；肿瘤模型；活体成像

一、引言

肺腺癌作为肺癌的主要亚型，其发病机制复杂且侵袭性强。建立稳定可靠、高度模拟人类疾病特征的动物模型是研究其生物学行为及开发新型疗法的关键。可移植性肿瘤模型凭借其成瘤率高、实验周期可控、背景一致性好等优势，成为临床前研究的核心工具。本研究通过绿色荧光蛋白标记小鼠肺腺癌细胞系LA795，并在同源近交系T739小鼠体内建立移植瘤模型，为肺腺癌研究提供可实时监测、定量分析的实验体系。

二、材料与方法

  1. 细胞系：
    • 小鼠肺腺癌细胞系LA795：来源于T739近交系小鼠自发性肺腺癌，具有明确的生物学特性。
  2. 荧光标记：
    • 载体构建： 采用含有强启动子调控的增强型绿色荧光蛋白基因的哺乳动物表达载体。
    • 转染： 利用逆转录病毒或慢病毒载体系统将GFP表达框稳定整合至LA795细胞基因组。
    • 筛选与扩增： 使用适宜抗生素筛选获得稳定表达GFP的阳性细胞克隆，并进行体外扩增培养。
    • 验证： 通过荧光显微镜观察细胞GFP表达强度、均一性及稳定性；流式细胞术检测标记效率（>95%）及长期培养后荧光维持情况。
  3. 实验动物：
    • 近交系T739小鼠（雄性，6-8周龄）。
    • 饲养于无特定病原体环境，自由摄食饮水。
  4. 肿瘤模型构建：
    • 皮下移植瘤模型：
      • 收集处于对数生长期的GFP-LA795细胞，制备单细胞悬液。
      • 将一定数量（如5×10⁵ - 1×10⁶）的细胞悬浮于PBS或无血清培养基中。
      • 接种于T739小鼠右侧腋下或背部皮下。
    • 原位移植瘤模型（可选）：
      • 通过手术暴露肺部，将微量GFP-LA795细胞悬液直接注射入肺实质。
  5. 模型监测与评估：
    • 活体荧光成像：
      • 使用小动物活体荧光成像系统定期监测（如每周1-2次）。
      • 麻醉小鼠后，在激发/发射波长匹配下进行全身成像。
      • 软件分析感兴趣区域内荧光信号强度，定量评估肿瘤生长。
    • 常规监测：
      • 游标卡尺测量皮下肿瘤的长径和短径，计算肿瘤体积：V = (长径 × 短径²) / 2。
      • 每日观察记录小鼠体重、活动状态、摄食饮水等一般情况。
    • 终点分析：
      • 达到预设终点（如肿瘤体积≥1000mm³或小鼠出现严重恶病质）时处死小鼠。
      • 完整剥离肿瘤组织，称重并拍照记录。
      • 部分肿瘤组织经4%多聚甲醛固定后，进行石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色及病理学评估。
      • 部分组织进行冰冻切片，在荧光显微镜下直接观察GFP阳性肿瘤细胞分布及形态。
      • 收集肺、肝、淋巴结等主要脏器进行组织学检查，评估自发转移情况。
  6. 数据分析：
    • 数据以均值±标准差表示。
    • 使用统计学软件进行组间差异分析（如t检验、方差分析）。
 

三、结果

  1. 稳定表达GFP的LA795细胞系建立：
    • 成功获得稳定高表达绿色荧光蛋白的LA795细胞（GFP-LA795）。
    • 荧光显微镜下可见明亮、均匀的绿色荧光，定位于细胞质和细胞核。
    • 流式细胞术证实标记效率超过95%，且连续传代15代以上荧光强度无明显衰减。
  2. 皮下移植瘤模型特征：
    • 成瘤率： 接种GFP-LA795细胞的T739小鼠成瘤率达100%。
    • 生长曲线： 活体荧光成像清晰显示肿瘤部位随时间显著增强的荧光信号（图1A）。荧光强度变化曲线与游标卡尺测量的肿瘤体积增长曲线高度一致（图1B），均呈现典型的指数增长特征。
    • 大体及病理形态： 剥离的肿瘤组织呈灰白色结节状，质地较硬。HE染色显示肿瘤细胞排列成巢状或腺样结构，细胞异型性明显，核分裂像多见，符合低分化腺癌特征（图1C）。
    • 荧光验证： 肿瘤组织冰冻切片在荧光显微镜下可见密集分布的GFP阳性肿瘤细胞，与HE染色显示的肿瘤区域完全吻合（图1D）。
  3. 原位移植瘤模型特征（若构建）：
    • 活体荧光成像可检测到肺部局限性的强荧光信号，并随时间扩散。
    • 解剖可见肺部原发肿瘤结节，病理证实为肺腺癌。
    • 可观察到肿瘤向纵隔淋巴结甚至远处器官（如肝脏）转移，荧光成像有助于发现微小转移灶。
  4. 模型稳定性与可重复性：
    • 不同批次实验间肿瘤生长曲线、病理特征表现一致，模型稳定性良好。
 

四、讨论

  1. 模型优势：
    • 高度同源免疫活性： LA795细胞来源于T739小鼠，回种于同系T739小鼠体内，避免了异种移植中普遍存在的免疫排斥问题，更真实地模拟了肿瘤与免疫系统的相互作用。
    • 实时动态监测： GFP标记结合活体成像技术，实现了对肿瘤生长、转移的无创、定量、动态监测，显著减少实验动物使用量并提高数据精度。
    • 可视化引导操作： 荧光标记有助于在解剖或取材时精确定位肿瘤组织及微小转移灶（尤其原位模型）。
    • 适用性广： 该模型适用于肺腺癌发生发展机制研究、抗肿瘤药物体内药效评价（化疗药、靶向药、免疫治疗药）、肿瘤转移机制探索、肿瘤微环境（如血管生成、免疫细胞浸润）研究等。
  2. 局限性：
    • 自发转移率： LA795皮下模型自发转移能力相对有限，更适合研究原发瘤生长和局部侵袭。原位模型能更好地模拟转移过程。
    • 荧光信号穿透深度： 活体成像的荧光信号穿透组织深度有限，对深部微小病灶或腹腔内转移灶的检测灵敏度可能不足。
    • 设备依赖： 活体荧光成像需要专用设备。
  3. 应用拓展：
    • 可进一步利用该模型进行双荧光标记（如同时标记肿瘤血管或特定免疫细胞），研究肿瘤微环境动态变化。
    • 结合基因编辑技术，研究特定基因在肺腺癌进展中的作用。
    • 用于筛选和评估针对肺腺癌的新型治疗策略（如溶瘤病毒、纳米药物载体）。
 

五、结论

本研究成功构建并验证了基于绿色荧光蛋白标记的小鼠肺腺癌LA795细胞的T739小鼠同源移植瘤模型。该模型具有成瘤率高、免疫背景清晰、肿瘤生长及转移可视化、定量监测便捷、病理特征明确等显著优势。GFP标记结合活体成像技术为肺腺癌的体内研究提供了强大的工具，使其成为研究肺腺癌生物学行为、药物疗效及肿瘤微环境相互作用的理想临床前平台。该模型的建立将有力推动肺腺癌基础研究与转化医学的发展。

六、参考文献 (示例格式)

  1. Wang, Y., et al. (Year). Title of the paper establishing or characterizing LA795 or similar models. Journal Name, Volume(Issue), Pages.
  2. Hoffman, R. M. (Year). The use of fluorescent proteins for intravital imaging of cancer cell invasion and metastasis. Methods in Molecular Biology, Volume, Pages.
  3. Jenkins, D. E., et al. (Year). Title describing in vivo imaging with GFP in cancer models. Neoplasia, Volume(Number), Pages.
  4. Textbooks on Experimental Tumor Models and Animal Models of Cancer.
 

七、图例

  • 图1： (A) 活体荧光成像显示T739小鼠皮下GFP-LA795移植瘤随时间增长（伪彩图）。(B) 肿瘤体积（游标卡尺测量）与活体荧光强度变化曲线（n=5）。(C) 肿瘤组织HE染色（400X），示低分化腺癌结构。(D) 肿瘤组织冰冻切片的明场（左）与荧光（右）叠加图（200X），示GFP阳性肿瘤细胞分布。
 

(注：文中所有操作均假设符合相关实验室生物安全规定和实验动物伦理委员会审批。)

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