大动物猴/犬B超引导下肝脏活检

大动物（猴/犬）B超引导下肝脏活检：核心检测项目详解

在兽医临床与科研领域，肝脏疾病的精准诊断对大型动物（如猴、犬）的健康管理至关重要。当血液生化指标、影像学检查提示肝脏存在潜在病变时，B超引导下经皮肝脏穿刺活检术凭借其微创、实时可视、靶向精准的优势，成为获取肝脏组织进行病理学评估的金标准。本文将重点聚焦于活检组织所涉及的核心检测项目，深入解析其临床与科研价值。

一、 核心检测项目：揭示肝脏微观世界的奥秘

获取的肝脏活检组织是宝贵的诊断材料，通过一系列专业的实验室检测，能够提供关于肝脏结构、功能和病因的详细信息。主要检测项目包括：

1. 组织病理学检查 (Histopathological Examination) - 诊断基石

   • 常规苏木精-伊红染色 (H&E)：
     • 核心目的： 评估肝脏整体结构和细胞形态。
     • 关键观察指标：
       • 肝小叶结构： 是否完整？有无塌陷、改建？
       • 肝细胞： 形态、大小（肿胀、萎缩）、排列（索状结构是否紊乱？）、胞浆特征（脂肪变性、气球样变、嗜酸性变、Mallory小体、淤胆、色素沉积）、核分裂象。
       • 汇管区： 炎症细胞浸润（类型：淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等；程度）、胆管变化（增生、损伤、阻塞）、纤维化程度。
       • 中央静脉及窦状隙： 充血、扩张、炎症浸润、窦周纤维化。
       • 坏死： 点状坏死、灶状坏死、桥接坏死、大片坏死？分布特点？
       • 其他： 肉芽肿、血管病变、异常沉积物（如淀粉样物质）。
   • 特殊染色 (Special Stains)： 针对H&E发现的问题进行深入探究：
     • Masson三色染色 / Sirius Red染色： 精确定量评估胶原纤维沉积的范围和模式（如汇管区周围、窦周、桥接纤维化），是诊断和分期肝纤维化/肝硬化的关键。
     • 过碘酸雪夫染色 (PAS)： 显示糖原、某些真菌、α1-抗胰蛋白酶缺乏症中的包涵体等。PAS-D（淀粉酶消化后）可区分糖原与其他物质。
     • 普鲁士蓝铁染色： 检测组织中的铁沉积（血色病、慢性溶血等）。
     • 罗丹宁染色 / 地衣红染色： 检测组织中的铜沉积（如犬的铜相关性肝病）。
     • 刚果红染色： 检测淀粉样蛋白沉积（淀粉样变性）。
     • 抗酸染色 (如Ziehl-Neelsen)： 筛查分枝杆菌感染（如结核）。
     • 网织纤维染色： 清晰显示肝板支架结构，评估肝细胞再生结节、早期纤维化。

2. 免疫组织化学 (Immunohistochemistry, IHC) - 精准定位与分型

   • 核心目的： 利用抗原-抗体反应原理，在组织切片上定位特定蛋白质（抗原）的表达。
   • 关键应用：
     • 病原体检测： 特异性识别肝炎病毒抗原（如犬传染性肝炎病毒CAV-1）、细菌、寄生虫等。
     • 肿瘤诊断与分型： 鉴别肝脏原发肿瘤（如肝细胞癌 - 可检测HepPar1, Arginase-1, Glypican-3；胆管癌 - 可检测CK7, CK19；神经内分泌肿瘤 - 检测Synaptophysin, Chromogranin A）与转移性肿瘤（寻找原发灶线索，如CK20/CDX2提示肠道来源）。
     • 病因探究： 检测特定蛋白的异常表达或沉积（如铜蓝蛋白、金属硫蛋白在铜相关性肝病中的分布）。
     • 细胞增殖活性： 检测Ki-67指数，评估肿瘤或再生细胞的增殖活性。

3. 分子生物学检测 (Molecular Diagnostics) - 洞察基因与病原

   • 核心目的： 在DNA或RNA水平上检测特定的遗传物质异常或病原体核酸。
   • 关键应用：
     • 病原体核酸检测 (PCR, RT-PCR, qPCR)： 高灵敏度、高特异性地检测肝脏组织中的病毒（如犬腺病毒CAV-1、犬瘟热病毒、未知肝炎病毒）、细菌（如钩端螺旋体）、原虫（如利什曼原虫）的核酸。尤其适用于血清学检测阴性但临床高度怀疑感染或病原载量低的情况。
     • 遗传性疾病检测： 对怀疑为遗传性代谢性肝病（如某些铜转运蛋白基因突变）的病例，可提取组织DNA进行特定基因的测序分析。
     • 肿瘤分子分型与预后标志物： 检测肿瘤相关的基因突变（如某些癌基因、抑癌基因）、融合基因或微卫星不稳定性等，为精准治疗和预后判断提供依据（在兽医肿瘤学中应用日益增多）。

4. 电镜检查 (Electron Microscopy) - 超微结构洞察

   • 核心目的： 在亚细胞器水平观察肝脏组织的超微结构变化。
   • 关键应用：
     • 诊断或确认某些代谢贮积病（如糖原贮积病、溶酶体贮积病）中特征性的胞浆内包涵体或异常结构。
     • 观察线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器的特异性病变。
     • 识别某些病毒感染在细胞内的特征性形态（如病毒颗粒）。
     • 辅助诊断不明原因的肝炎或肝硬化。虽然不常规进行，但在疑难病例中有重要价值。

5. 肝脏铜/铁定量 (Hepatic Copper/Iron Quantification) - 特定元素评估

   • 核心目的： 精确测量肝脏组织中的铜或铁含量。
   • 关键应用：
     • 铜相关性肝病： 对犬（尤其是某些易感品种如贝灵顿梗、西高地白梗、拉布拉多寻回犬等）和实验猴（在毒理学研究中），肝铜定量是诊断和监测铜相关性肝病（铜蓄积症）的金标准，对指导螯合剂治疗至关重要。
     • 铁过载疾病： 评估血色病或其他原因导致的铁过载程度。

二、 检测项目的选择与整合：个体化诊断策略

选择哪些检测项目并非固定不变，而是基于：

• 临床病史与体格检查： 品种、年龄、性别、症状、病程、用药史、环境暴露史等。
• 前期检查结果： 血液学、血清生化（尤其是肝酶ALT, AST, ALP, GGT；胆红素；胆汁酸；白蛋白；凝血功能）、影像学（B超、X光、CT/MRI）发现。
• 初步H&E病理评估结果： 根据镜下所见（如炎症类型、坏死模式、有无纤维化/肿瘤、特殊结构或包涵体）决定下一步需要进行的特殊染色、IHC或分子检测。
• 具体怀疑的疾病： 例如：
  • 怀疑感染性肝炎：优先考虑病原体的IHC/PCR检测。
  • 怀疑铜相关性肝病：需进行铜染色和肝铜定量。
  • 怀疑肿瘤：IHC是明确分型的关键。
  • 不明原因肝酶升高或肝硬化：需系统进行H&E、纤维化染色、特殊染色（铁、铜等）及可能的分子检测。
  • 代谢性疾病或遗传病：可能需要电镜或特定基因检测。

三、 B超引导技术的核心优势

• 精准靶向： 实时超声成像可清晰显示肝脏病灶（结节、回声异常区）或避开大血管、胆囊等重要结构，显著提高取材的准确性和安全性。
• 微创安全： 经皮穿刺创伤小，并发症（出血、胆漏等）风险远低于开腹活检。
• 实时监控： 操作全程可视，确保针道正确，提升成功率。
• 可重复性： 便于对病灶进行动态监测或疗效评估时的重复取样。

四、 重要注意事项

• 严格适应症与禁忌症： 术前需评估动物凝血功能（PT, APTT）、血小板计数，排除严重凝血障碍、大量腹水、严重心肺功能不全等禁忌症。
• 规范操作与麻醉： 需由经验丰富的兽医操作，动物需进行安全有效的镇静或麻醉。严格无菌操作。
• 样本处理： 活检组织需迅速、正确地固定（通常为10%中性福尔马林，电镜样本需特殊固定液如戊二醛）、标记、送检，保证检测结果的可靠性。需要新鲜冻存样本的检测（如部分分子检测）需提前与实验室沟通。
• 结果判读： 肝脏病理变化复杂多样，且常为多因素共同作用的结果。检测结果的解读必须由专业兽医病理学家结合完整的临床信息进行综合分析，避免误诊或漏诊。

五、 总结

B超引导下肝脏活检为大型动物（猴、犬）肝脏疾病的精准诊疗提供了不可替代的组织学依据。其核心价值在于通过一系列多层次的检测项目（组织病理学、特殊染色、免疫组化、分子检测、电镜、元素定量） ，全方位揭示肝脏病变的本质——从结构异常、炎症活动、纤维化程度到病原感染、肿瘤性质、代谢缺陷及遗传基础。兽医临床工作者应充分理解各项检测的目的、意义和应用场景，根据个体病例的具体情况，科学选择和整合检测项目，并结合B超引导技术的优势，最终实现对肝脏疾病更精准的诊断、更合理的治疗干预和更可靠的预后判断，从而显著提升患病动物的生存质量和健康水平。