溶血百分比测定

发布时间：2026-04-16 阅读量：11 作者：生物检测中心

溶血百分比测定：原理、方法与临床意义

溶血，即红细胞破裂导致血红蛋白释放至血浆或血清中的现象，是临床检验和输血医学中需要密切监测的重要指标。溶血百分比测定（Hemolysis Percentage Assay 或 Hemolysis Index, HI）提供了一种定量评估样本溶血程度的方法，对确保检验结果准确性、评估血液制品质量和诊断某些疾病状态至关重要。

一、 核心原理：光学特性的利用

测定溶血百分比的核心原理基于血红蛋白独特的光吸收特性。血红蛋白（尤其是氧合血红蛋白）在 415 nm 波长附近存在一个显著的吸收峰（Soret带）。当红细胞破裂，血红蛋白释放到血浆或血清中，该部分液体的颜色会因血红蛋白浓度升高而发生变化（由淡黄色变为粉红、红色甚至棕色），其在415 nm处的吸光度也随之增加。

溶血百分比的计算就是通过比较 “溶血样本” 与 “理论上同等条件下完全溶血样本” 在该特征波长下的吸光度差异来实现的。

二、 标准检测方法（分光光度法）

目前最常用且公认的标准方法是分光光度法。具体步骤如下：

  1. 样本采集与处理：

    • 严格按照操作规程采集静脉血样本（通常使用真空采血管，避免使用易导致溶血的采血针或剧烈振荡）。
    • 将采集的全血样本 轻柔混匀 后，平均分装到 三支洁净、匹配的试管（如微量比色杯或小试管）中：
      • 溶血管 (H管)： 包含待测样本的全血。此管将模拟样本在检测前的状态。
      • 全血管 (T管)： 包含待测样本的全血。此管用于制备“完全溶血”的对照。
      • 空白管 (B管)： 仅含与样本等量的生理盐水或适用的稀释液。

  2. 制备完全溶血对照 (T管)：

    • 向 T管 中加入少量蒸馏水或专用溶血剂（如皂素溶液），充分混合 以确保所有红细胞完全破裂。也可通过反复冻融（如-20℃冷冻后室温融化，重复数次）实现完全溶血。
    • 离心：将 T管 以足够高的转速（例如 ≥2000 x g）离心 10-15分钟，使细胞碎片沉淀。
    • 仔细吸取上清液（即完全溶血的血红蛋白溶液）至另一洁净试管，避免吸入沉淀物。

  3. 处理溶血管 (H管) 与空白管 (B管)：

    • 将 H管（未处理的样本全血）以 与T管相同的离心条件（≥2000 x g, 10-15分钟）离心。
    • 仔细吸取 H管 的上层血浆（血浆相）至洁净试管，避免吸入细胞层或扰动沉淀。
    • B管（生理盐水）无需特殊处理，用作分光光度计调零的空白对照。

  4. 分光光度测定：

    • 使用符合要求的分光光度计。
    • 将 B管（空白） 放入仪器，在 415 nm 波长下调零。
    • 依次测定：
      • H管血浆上清液 (H<sub>plasma</sub>) 在415 nm处的吸光度值 (A<sub>H</sub>)。
      • T管完全溶血上清液 (T<sub>total</sub>) 在415 nm处的吸光度值 (A<sub>T</sub>)。

  5. 计算溶血百分比 (HI%)：

    • 使用以下公式进行计算：
      溶血百分比 (HI%) = [(A<sub>H</sub> - A<sub>B</sub>) / (A<sub>T</sub> - A<sub>B</sub>)] × 100%
    • 其中：
      • A<sub>H</sub> = 溶血管血浆上清液在415 nm的吸光度
      • A<sub>T</sub> = 完全溶血管上清液在415 nm的吸光度
      • A<sub>B</sub> = 空白管在415 nm的吸光度（通常为0或接近0，尤其在用其调零后）
 

三、 临床应用价值

溶血百分比测定具有广泛的临床意义：

  1. 检验前质量控制：

    • 评估样本质量： 是判断血液样本是否因采血不当（如抽吸过猛、使用小针头）、运输震荡、储存条件不当（冷冻或过热）或延迟处理而导致溶血的关键指标。HI%过高提示样本可能不合格，其产生的检验结果（尤其是钾离子、乳酸脱氢酶LDH、转氨酶AST/ALT、酸性磷酸酶ACP、镁离子、铁离子等）可能显著假性升高，而某些项目（如钠离子）可能轻微降低。
    • 制定接受/拒绝标准： 实验室根据测定项目、方法学和可接受的干扰水平，设定HI%的临界值（阈值）。超过该阈值的样本可能被要求重新采集，或在报告结果时注明“样本溶血，结果仅供参考”。

  2. 输血医学：

    • 血液制品质量控制： 评估储存或处理过程中（如冷冻、解冻、离心、过滤、辐照、机械泵输注）红细胞损伤的程度。对于红细胞制品（如悬浮红细胞、洗涤红细胞、解冻去甘油红细胞），HI%是评价其保存质量和输注安全性的重要指标之一。国际上常将游离血红蛋白浓度或HI%作为红细胞制品溶血程度的量化标准。
    • 输血反应调查： 在疑似溶血性输血反应时，同时测定受血者输血前、后样本以及输注血液制品本身的HI%（或游离血红蛋白浓度），是鉴别急性溶血反应的重要实验室证据。

  3. 临床诊断与监测：

    • 血管内溶血性疾病： 如阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、微血管病性溶血性贫血(MAHA，如血栓性血小板减少性紫癜TTP、溶血尿毒综合征HUS)、严重感染（如梭状芽孢杆菌感染）、某些药物或化学物质中毒、严重烧伤、机械性心脏瓣膜等疾病状态下，监测HI%有助于评估溶血的程度和疾病活动性。
    • 手术与体外循环： 心脏手术、体外膜肺氧合(ECMO)或血液透析等过程中，红细胞会受到机械性损伤，监测HI%可评估血液破坏程度。
    • 新生儿溶血病： 评估新生儿因母婴血型不合（如ABO或Rh血型不合）导致的溶血严重程度。
 

四、 关键注意事项与局限性

  1. 标准化操作： 结果的准确性高度依赖操作的标准化。离心速度、时间、温度必须严格一致。吸取血浆时务必小心，避免吸入细胞或扰动沉淀。
  2. 及时检测： 血浆/血清中的游离血红蛋白相对稳定，但样本分离后应尽快测定（最好在2小时内），避免长时间放置导致进一步变化或被代谢。
  3. 干扰因素：
    • 高胆红素血症： 胆红素在蓝紫光区也有吸收（峰值约450nm），可能会对415nm的测定造成正干扰（使HI%偏高）。严重黄疸样本可能需要校正或采用其他波长组合（如双波长法）。
    • 脂血： 乳糜微粒会散射光线，导致吸光度普遍升高，可能干扰测定。超速离心去除脂质或使用空白校正（有时需专用试剂）是常用对策。
    • 其他色素： 某些药物或其代谢物可能产生颜色干扰。
  4. 仪器校准与性能验证： 分光光度计需定期进行波长准确性和吸光度准确性的校准。新方法或更换关键试剂后应进行性能验证。
  5. 解读需结合临床： HI%升高仅提示存在溶血，其病因需要结合患者病史、临床表现、其他实验室检查（如网织红细胞计数、结合珠蛋白、游离血红蛋白、LDH、胆红素、尿含铁血黄素、Coombs试验等）综合判断。
  6. 离心诱发的溶血： 离心力过大或时间过长本身可能导致额外的溶血，因此选择适当的离心条件是减少假阳性结果的关键。
  7. 报告单位： 除了百分比，也可转换为游离血红蛋白浓度 (g/L 或 mg/dL) 报告，两者有换算关系（需要知道原始血细胞压积 Hct 或血红蛋白总量HgB<sub>total</sub>）。实验室应明确报告方式。
 

总结：

溶血百分比测定（HI%）是临床实验室和输血部门不可或缺的质量控制和诊断工具。基于血红蛋白在415nm特征吸收峰的分光光度法是其标准检测方法。准确测定HI%对于识别不合格检验样本、保证血液制品安全和质量、诊断和监测血管内溶血性疾病至关重要。深刻理解其原理、严格遵守操作规程、认识其局限性并结合临床背景进行解读，是获得可靠结果并发挥其最大临床价值的关键。持续的标准化和质量控制是确保该方法结果可靠性和可比性的基石。

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