功能性消化不良模型(大鼠)

功能性消化不良（FD）大鼠模型构建与检测方案

一、模型构建方法

1. 病因诱导法
   • 夹尾刺激法：每日固定时段夹大鼠尾根部（1min/次，间隔30s，重复10次），持续14-21天。
   • 不规则饮食法：交替禁食24h/过量喂养高脂饲料，持续4周。
   • 复合因子法：夹尾刺激+0.1mol/L盐酸灌胃（2ml/只/日）+冰水游泳（10min/日）。

二、核心检测项目（验证模型成功性及机制研究）

(一) 胃肠动力功能评估

1. 胃排空率测定

   • 方法：禁食12h后灌胃0.1%酚红溶液（2ml/100g），20min后处死取胃。
   • 检测：胃内容物离心取上清，用分光光度计（560nm）测吸光度。
   • 计算：排空率(%) = [1 - (实验组吸光度/对照组吸光度)] × 100%。

2. 小肠推进比测定

   • 方法：灌胃含10%活性炭的0.5%羧甲基纤维素钠溶液（1ml/100g），30min后处死。
   • 检测：测量幽门至炭末前沿距离（L1）及幽门至回盲部全长（L2）。
   • 计算：推进比(%) = (L1/L2) × 100%。

3. 在体胃电活动记录

   • 操作：麻醉大鼠，植入铂金电极于胃窦浆膜层，连接生理记录仪。
   • 参数：慢波频率（次/min）、振幅（mV）、节律紊乱指数。

(二) 内脏敏感性检测

1. 腹壁撤回反射（AWR）评分
   • 方法：结肠内置入球囊导管，梯度充气（0.4-1.6ml），记录疼痛阈值（引起腹部收缩的最小压力）。
   • 评分标准： 0级：无反应；1级：轻微抬头； 2级：腹肌收缩；3级：骨盆抬起； 4级：身体弓起。

(三) 胃内分泌功能分析

1. 血清/组织胃肠激素检测
   • 指标：胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）、血管活性肠肽（VIP）。
   • 方法：取血或胃组织匀浆，采用酶联免疫吸附法（ELISA）定量。

(四) 炎症与屏障功能

1. 胃组织病理学

   • H&E染色：观察胃黏膜层炎症细胞浸润、腺体结构完整性（按0-3级评分）。
   • 阿利新蓝- PAS染色：评估黏液层厚度。

2. 紧密连接蛋白检测

   • 指标：Occludin、Claudin-1、ZO-1。
   • 方法：免疫组化或Western Blot定量。

(五) 神经调控机制

1. 迷走神经活性

   • 心率变异性（HRV）分析：记录ECG，计算低频（LF）/高频（HF）比值，反映交感-迷走平衡。

2. 脑肠肽相关基因表达

   • 靶点：5-HT₃受体、CRF、BDNF。
   • 方法：实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测下丘脑/延髓组织。

三、可选高级检测

四、模型验证标准

1. 成功标志：
   • 胃排空率降低 >20% （vs 对照组）
   • 小肠推进比下降 >15%
   • AWR评分阈值降低 ≥30%
   • 血清MTL/GAS比值异常（通常MTL↓，GAS↑）

五、注意事项

1. 所有操作符合动物伦理要求（如麻醉、镇痛、人道终点）。
2. 检测前禁食12h（自由饮水），环境温度维持在25±1℃。
3. 设立空白对照组、模型组、阳性药物对照组（如多潘立酮组）。

本方案提供系统性检测框架，研究者可根据具体科学问题选择组合指标。实验设计需严格遵循随机、对照、盲法原则以保证结果可靠性。