干燥皮肤瘙痒模型(小鼠)

发布时间：2025-06-10 08:19:14 阅读量：6 作者：生物检测中心

干燥皮肤瘙痒小鼠模型：核心检测项目详解

建立稳定可靠的干燥皮肤瘙痒小鼠模型是研究该病理机制和评价干预措施的基础。本模型主要通过诱导皮肤屏障功能障碍模拟人类干燥性瘙痒症的核心特征。以下重点阐述模型建立后的关键检测项目：

一、 皮肤屏障功能评估 (核心指标)

  1. 经皮失水 (Transepidermal Water Loss, TEWL):

    • 目的： 直接量化皮肤屏障完整性受损程度。TEWL值升高表明角质层防止水分蒸发的功能下降。
    • 方法： 使用专用探头无创测量模型小鼠背部或处理区域皮肤表面的水分蒸发速率。需在恒温恒湿环境中进行，多次测量取平均值。

  2. 角质层含水量 (Stratum Corneum Hydration):

    • 目的： 评估皮肤最外层的实际水分含量。干燥皮肤模型此值显著降低。
    • 方法： 利用皮肤水分测试仪，基于电容或电导原理，无创测量处理区域皮肤的电容值（与含水量正相关）。

二、 皮肤组织病理学与形态学分析

  1. 苏木精-伊红染色 (H&E 染色):

    • 目的： 观察表皮厚度变化（通常表现为角化过度、棘层肥厚或萎缩）、真皮炎症细胞浸润、血管扩张等基本病理改变。
    • 方法： 取模型区域皮肤组织，石蜡包埋切片，常规H&E染色，光学显微镜下观察并拍照记录。

  2. 表皮厚度测量：

    • 目的： 定量分析表皮增生或萎缩的程度。
    • 方法： 在H&E染色切片上，使用显微图像分析软件，随机选取多个视野测量表皮（从基底层到角质层）的厚度，计算平均值。

  3. 肥大细胞染色 (如甲苯胺蓝染色或免疫组化):

    • 目的： 检测真皮层肥大细胞的数量和活化状态（脱颗粒），肥大细胞释放的组胺是诱发瘙痒的关键介质。
    • 方法： 皮肤切片进行特异性染色（如甲苯胺蓝显示异染颗粒）或使用类胰蛋白酶等肥大细胞标记物的抗体进行免疫组化染色，计数单位面积内的肥大细胞数量并评估脱颗粒比例。

三、 瘙痒行为学观察 (核心指标)

  1. 自发搔抓行为记录：
    • 目的： 直接反映模型小鼠的瘙痒程度，是评价模型成功与否和治疗效果的金标准。
    • 方法：
      • 视频记录分析： 将小鼠置于透明观察笼中，用摄像机连续记录一段时间（如30分钟）。回放录像，计数小鼠用后爪搔抓处理区域皮肤的次数（定义为抬起后爪快速、连续地搔抓动作，通常连续数次计为1次搔抓行为），并记录每次搔抓的持续时间。
      • 观察者盲法评分： 训练有素的观察者在规定时间内直接计数搔抓次数和持续时间。需采用盲法以避免主观偏差。

四、 瘙痒相关介质与受体检测

  1. 组织胺 (Histamine) 水平检测：

    • 目的： 组胺是经典致痒介质，其释放增多是诱发瘙痒的重要环节。
    • 方法： 取模型区域皮肤组织，匀浆后，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测组织匀浆上清液中组胺的含量。

  2. 神经肽类物质检测 (如 P物质, Substance P, SP):

    • 目的： SP是感觉神经末梢释放的重要致痒神经肽，参与神经源性炎症和瘙痒信号传递。
    • 方法： 取皮肤组织或脊髓背根神经节，采用ELISA、免疫组化或Western Blot等方法检测SP的表达水平。

  3. 瞬时受体电位香草酸亚型1 (TRPV1) 表达分析：

    • 目的： TRPV1是皮肤感觉神经元上的关键瘙痒感受器，在干燥瘙痒中被激活或表达上调。
    • 方法： 取皮肤组织或背根神经节，通过免疫组化（定位）、Western Blot或qRT-PCR（定量）检测TRPV1蛋白或mRNA的表达水平。

  4. 蛋白酶激活受体2 (PAR2) 表达分析：

    • 目的： PAR2在角质形成细胞和感觉神经元上表达，被丝氨酸蛋白酶激活后参与非组胺依赖的瘙痒通路，在干燥瘙痒中可能起重要作用。
    • 方法： 类似TRPV1，采用免疫组化、Western Blot或qRT-PCR检测皮肤组织中PAR2的表达。

五、 炎症因子检测

  1. 促炎细胞因子水平检测 (如 IL-4, IL-13, IL-31, TNF-α, TSLP):
    • 目的： 评估皮肤局部炎症反应状态。多种细胞因子（特别是IL-31、TSLP）被证实与慢性瘙痒（包括干燥相关瘙痒）密切相关。
    • 方法： 取皮肤组织匀浆上清液或血清，使用多重液相芯片技术或特异性ELISA试剂盒检测目标细胞因子的浓度。也可通过qRT-PCR检测皮肤组织中相应细胞因子的mRNA表达水平。

六、 神经敏感性与活性评估 (进阶)

  1. 化学刺激诱发的搔抓行为：

    • 目的： 评估感觉神经元的敏化程度。干燥皮肤模型小鼠对致痒剂（如组胺、氯喹、5-羟色胺）的反应性通常增强。
    • 方法： 在模型皮肤上微量注射或涂抹标准剂量的致痒化合物，记录随后一段时间内（如30-60分钟）的搔抓次数，与对照组比较。

  2. 神经纤维密度与形态 (免疫组化):

    • 目的： 观察表皮内神经纤维的分布密度和形态变化（如神经萌发），这可能与感觉异常和瘙痒持续有关。
    • 方法： 使用泛神经元标记物（如PGP9.5）或特异性神经肽（如CGRP）抗体对皮肤切片进行免疫荧光染色，共聚焦显微镜下观察并定量分析表皮内神经纤维的长度和密度。

总结：

评价干燥皮肤瘙痒小鼠模型的核心在于皮肤屏障功能 (TEWL, 含水量)、病理改变 (表皮厚度, 炎症浸润) 和瘙痒行为 (搔抓次数/持续时间) 这三大支柱。深入机制研究则需检测关键致痒介质 (组胺, SP, 细胞因子) 及信号通路受体 (TRPV1, PAR2) 的表达与活性。进阶研究可探索神经敏化与重塑。这些检测项目相互关联，共同构建了对模型状态和治疗效果的综合评价体系。研究中务必严格遵循动物伦理规范。