MC903诱导的瘙痒模型(小鼠)

发布时间：2025-06-10 08:19:14 阅读量：6 作者：生物检测中心

MC903诱导的小鼠瘙痒模型：检测项目详解

MC903（他扎罗汀）是一种维生素D3类似物，局部反复涂抹于小鼠皮肤（如耳部或背部）可诱导类似人类特应性皮炎（AD）的慢性炎症状态，并伴随显著瘙痒行为。该模型是研究瘙痒机制及药物筛选的重要工具。其核心检测项目主要涵盖以下方面：

一、皮肤炎症与屏障功能评估（基础病理改变）

  1. 临床症状评分（宏观观察）：

    • 指标： 红斑、水肿、表皮脱落/鳞屑、表皮粗糙程度、渗出/结痂。
    • 方法： 每日或定期对处理区域皮肤进行视觉评分（通常采用0-4分制）。
    • 意义： 评估炎症严重程度和疾病进展。

  2. 皮肤厚度测量：

    • 指标： 耳厚度或背部皮肤厚度。
    • 方法： 使用精密测厚仪（如千分尺）定期测量处理区域。
    • 意义： 量化炎症引起的皮肤水肿和增生。

  3. 组织病理学分析（微观结构）：

    • 指标 (H&E 染色)：
      • 表皮： 表皮增生/增厚（棘层肥厚）、海绵层水肿。
      • 真皮： 炎性细胞浸润密度、类型（嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞等）、血管扩张。
    • 指标 (特殊染色)：
      • 肥大细胞计数 & 脱颗粒 (甲苯胺蓝或Giemsa染色)： 评估肥大细胞活化状态。
      • 胶原沉积 (Masson三色染色)： 评估早期纤维化倾向。
      • 杯状细胞/粘液 (PAS染色)： 评估特定腺体变化（如耳部）。
    • 方法： 取皮损组织制作石蜡切片，染色后显微镜下观察、照相、定量分析。
    • 意义： 直观反映皮肤炎症、结构损伤的具体细胞和组织学变化。

  4. 表皮屏障功能检测：

    • 指标： 经表皮失水率。
    • 方法： 使用便携式仪器在特定温湿度条件下测量处理区域皮肤水分蒸发量。
    • 意义： 评估皮肤屏障破坏程度，是AD的关键特征。

二、瘙痒行为学测定（核心表型）

  1. 自发抓挠行为记录与分析：
    • 指标： 抓挠次数、抓挠持续时间、抓挠发作次数。
    • 方法：
      • 录像观察法： 将小鼠置于透明观察笼中，适应后连续录像（通常30-60分钟），人工或软件分析录像。需明确定义“抓挠事件”（通常为后爪快速、重复地搔抓处理区域皮肤）。
      • 磁环/加速计法： 在动物后肢佩戴微型磁环或加速度传感器，自动记录特定动作频率和强度。
    • 意义： 最直接、最重要的瘙痒行为学指标，反映模型诱导的瘙痒强度。通常在涂抹MC903后特定时间窗（如涂抹后30-90分钟内）进行观察。

三、炎症介质与瘙痒相关分子表达（机制探究）

  1. 基因表达水平 (qRT-PCR)：

    • 指标：
      • 炎症因子： IL-4, IL-5, IL-13, IL-31, IL-33, TSLP, TNF-α。
      • 瘙痒相关因子： NGF, BDNF, TRPV1, TRPA1, PAR2, GRP, Mrgprs (如MrgprA3, MrgprC11)。
      • 神经肽： 物质P (Tac1), 降钙素基因相关肽 (Calca)。
    • 方法： 提取处理区域皮肤组织总RNA，反转录后进行实时荧光定量PCR分析目标基因的mRNA表达量（常用ΔΔCt法，以参考基因如Gapdh, Actb标准化）。
    • 意义： 探究驱动炎症和瘙痒的分子信号通路。

  2. 蛋白表达水平：

    • 指标： 与上述基因对应的蛋白，特别是关键的细胞因子（如IL-31, TSLP）、趋化因子、神经肽（SP, CGRP）、受体（如PAR2, TRPV1, IL-31RA）等。
    • 方法：
      • 酶联免疫吸附试验/多重免疫吸附试验： 测定皮肤组织匀浆上清液中可溶性因子的浓度。
      • 免疫组织化学/免疫荧光染色： 定位目标蛋白在皮肤组织（表皮、真皮、神经纤维）中的表达位置、分布和丰度（半定量或定量分析）。可标记特定细胞类型（如神经纤维PGP9.5）或炎症细胞标志物。
      • Western Blot： 检测特定蛋白在组织中的总表达量。
    • 意义： 在基因水平基础上，更直接反映功能性蛋白的表达和定位，揭示炎症与神经支配的变化。

四、神经敏感性评估（瘙痒感受器功能）

  1. 神经敏感性测试：
    • 指标：
      • 瘙痒原诱发抓挠： 组胺、氯喹、SLIGRL-NH2 (PAR2激动剂) 等皮内注射诱发抓挠反应的次数或潜伏期。
      • 机械敏感性： 使用von Frey纤维丝测定处理区域皮肤的机械刺激瘙痒阈值或机械痛敏阈值。
      • 冷敏感性： 应用冷刺激（如丙酮蒸发）诱发抓挠行为。
    • 方法： 在特定时间点（如建模后期），对处理区域皮肤施加标准化刺激，记录行为反应（主要是抓挠）。
    • 意义： 评估模型诱导的皮肤感觉神经末梢敏感化状态（瘙痒感受器反应性增高）。

总结：

MC903小鼠瘙痒模型的检测项目是一个多维度、多层次的体系。研究者需根据具体研究目的（如药效评价、机制探索）选择合适的组合：

  • 基础评价： 临床症状评分、皮肤厚度、抓挠行为、H&E病理、TEWL。
  • 深入机制： 加入炎症/瘙痒相关因子mRNA和蛋白检测（qRT-PCR, ELISA, IHC/IF）、神经敏感性测试、更细致的病理染色（肥大细胞等）。
  • 靶点验证： 聚焦特定信号通路分子检测（如PAR2, IL-31, TRP通道）。

对这些指标的全面分析，能够清晰描绘MC903诱导的皮肤炎症、屏障破坏、瘙痒行为及其背后的分子和神经生物学机制，为后续研究提供坚实基础。