二氢睾酮诱导的脱发模型(小鼠)

二氢睾酮诱导的小鼠脱发模型构建与检测方案

一、模型建立原理

雄激素源性脱发（AGA）的核心机制是二氢睾酮（DHT）与毛囊雄激素受体（AR）结合，导致毛囊微型化及生长周期紊乱。本模型通过外源性DHT持续刺激，模拟人类AGA的病理进程。

二、造模方法

1. 动物选择：成年C57BL/6小鼠（雄性或雌性，6-8周龄）
2. DHT给药：
   • 皮下注射法：溶解于油性溶剂中的DHT（剂量：1-5 mg/kg/天），连续注射21-28天
   • 局部涂抹法：含DHT的凝胶（浓度0.1%-1%），每日涂抹背部脱毛区
3. 对照组：溶剂对照（同体积油剂或空白凝胶）

核心检测项目与方案

1. 宏观毛发评估

• 毛发密度评分（0-4级）：
  • 0级：完全覆盖
  • 4级：显著裸露（>70%）
  • 每周拍照记录，使用图像分析软件计算脱毛区域占比
• 毛发生长速率：
  • 剃毛后记录毛干再生长度（mm/天）

2. 组织病理学检测

• 样本处理：
  • 取背部皮肤，4%多聚甲醛固定 → 石蜡包埋 → 纵切面切片（厚度5 μm）
• 染色与观察：

3. 分子机制检测

• qPCR检测毛囊相关基因（相对mRNA表达量）：MarkDown- **雄激素通路**：AR, SRD5A1, SRD5A2 - **凋亡相关**：Bax/Bcl-2, Caspase-3 - **生长因子**：TGF-β1, IGF-1, Wnt5a - **毛囊干细胞标记**：KRT15, CD34
• Western Blot：
  • AR蛋白核转位水平
  • TGF-β1/Smad3通路活化
  • Wnt/β-catenin通路抑制
• 免疫组化/免疫荧光：
  • AR定位：毛乳头细胞核阳性率
  • Ki67：毛球部增殖细胞减少
  • KRT15：毛囊隆突区干细胞丢失

4. 毛囊周期分析

• 毛囊分期标准：
• 统计方法：计数≥100个毛囊，计算各期比例

模型验证关键指标

1. 成功模型标准：

   • 脱毛区毛发密度下降 >50%（vs. 对照组）
   • 休止期毛囊占比 >40%
   • AR核定位显著增强（免疫组化评分+++以上）
   • TGF-β1 mRNA表达上调 ≥2倍

2. 药效学验证（可选）：

   • 阳性对照药物（如非那雄胺）干预后逆转上述表型

注意事项

1. 品系差异：C57BL/6小鼠对DHT敏感，但C3H品系更接近人类毛囊周期
2. 性别选择：雌鼠需卵巢切除以消除内源性雌激素干扰
3. 动态监测：DHT效应在给药14天后显著，建议21天为关键观察点

附录：实验流程示意图

本方案通过多维度检测DHT对毛囊结构、周期及分子通路的干扰，可有效模拟雄激素脱发病理进程，适用于发病机制研究及防脱药物筛选。