小鼠IgA肾炎模型检测项目详解
一、 肾脏功能损伤指标（尿液检测）
- 蛋白尿 (Proteinuria):
- 检测方法： 代谢笼收集24小时尿液。
- 关键指标： 尿蛋白总量 (mg/24h)、尿蛋白/尿肌酐比值 (UPCR, mg/mg)。
- 意义： 评估肾小球滤过屏障损伤的核心指标，模型成功建立的直接证据。
- 血尿 (Hematuria):
- 检测方法： 尿液试纸法、尿沉渣镜检红细胞计数。
- 意义： 反映肾小球炎症活动性和损伤程度。
- 尿微量白蛋白 (mAlb): 更早期敏感的肾小球损伤指标。
- 尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG): 反映肾小管损伤的敏感指标。
二、 血清学指标（血液检测）
- 血清肌酐 (SCr) 和尿素氮 (BUN):
- 检测方法： 生化分析仪检测。
- 意义： 经典评估肾小球滤过功能（肾功能）的指标，在模型后期或严重损伤时升高。
- 血清IgA水平：
- 检测方法： ELISA法检测总IgA。
- 意义： 评估全身性IgA产生是否亢进，部分模型可见升高。
- 致病性IgA及免疫复合物：
- 检测方法： ELISA法检测含半乳糖缺陷型IgA1 (Gd-IgA1) 的抗体、IgA-IgG免疫复合物、IgA-纤连蛋白复合物等（需特异性抗体）。
- 意义： 检测循环中致病性IgA及其复合物水平，反映核心发病机制。
- 补体成分 (如 C3): 评估补体系统活化程度。
三、 肾脏组织病理学检查（金标准）
- 光镜检查 (Light Microscopy, LM):
- 样本： 肾组织石蜡切片（常用H&E, PAS, PASM, Masson染色）。
- 观察重点：
- 系膜细胞增生 (Mesangial hypercellularity)： 细胞数增多程度（通常按0-3级评分）。
- 系膜基质扩张 (Mesangial matrix expansion)： 基质增宽程度（0-3级评分）。
- 新月体形成 (Crescents)： 肾小球囊壁层上皮细胞增生（计数阳性肾小球比例及大小）。
- 肾小管萎缩 (Tubular atrophy)、间质纤维化 (Interstitial fibrosis)、炎细胞浸润 (Inflammatory cell infiltration)： 评价慢性化病变程度（常用半定量评分）。
- 免疫荧光检查 (Immunofluorescence, IF)：
- 样本： 肾组织冰冻切片。
- 染色： 应用荧光标记抗体（核心！）。
- 观察重点：
- IgA沉积 (IgA deposits)： 系膜区颗粒状或团块状沉积是诊断的核心标志（强度通常按0-4+分级）。
- 共沉积物： IgG, IgM, C3（尤其是C3常与IgA共沉积于系膜区，强度和分布模式需记录）。
- 沉积定位： 明确沉积主要在系膜区（系膜增生性IgAN的特征）。
- 电子显微镜检查 (Electron Microscopy, EM)：
- 样本： 肾组织超薄切片。
- 观察重点：
- 电子致密物沉积 (Electron-dense deposits)： 确认系膜区电子致密物沉积的存在（是免疫复合物的超微表现）。
- 沉积部位： 精确观察沉积主要在系膜区，偶见内皮下或上皮下沉积。
- 足细胞损伤： 足突融合的程度。
四、 肾脏组织炎症与纤维化分子标志物
- 检测方法： 免疫组化 (IHC) 或免疫荧光 (IF) 染色、实时荧光定量PCR (qPCR)、蛋白质印迹 (Western Blot)。
- 检测目标：
- 炎症因子： TNF-α, IL-6, IL-1β, TGF-β1, MCP-1 等（蛋白或mRNA水平）。
- 纤维化标志物： α-SMA (肌成纤维细胞活化), Collagen I, Collagen III, Fibronectin 等（蛋白或mRNA水平）。
- 趋化因子及粘附分子： ICAM-1, VCAM-1等。
- 补体活化相关： C3a, C5a, MAC (C5b-9), Properdin 等。
- 信号通路分子： NF-κB, p-STAT3 等活化状态。
五、 免疫细胞分析
- 肾脏浸润免疫细胞：
- 方法： 流式细胞术分析肾单细胞悬液。
- 目标： T细胞 (CD4+, CD8+, Th17, Treg)、B细胞、巨噬细胞 (M1/M2型)、中性粒细胞、树突状细胞等的比例和数量变化。
- 脾脏等淋巴器官细胞： 分析淋巴细胞亚群比例、活化状态（如CD69, CD25表达）及体外细胞因子分泌能力。
总结： 全面评估小鼠IgA肾炎模型需整合功能（尿液、血液）、结构（组织病理）、免疫沉积（免疫荧光/电镜）及分子机制（炎症/纤维化因子、信号通路、免疫细胞）等多层次检测数据。其中，系膜区IgA沉积（免疫荧光确认）是病理诊断的基石，蛋白尿是功能损伤的关键表现，而血清致病性IgA复合物、组织炎症/纤维化和免疫细胞分析则深入揭示疾病机制并为干预研究提供靶点和评价指标。研究者应根据具体实验目的选择核心和最相关的检测组合。
注意事项：
- 样本采集： 严格按照动物伦理要求操作，尿液、血液、组织样本的采集、处理和保存方法需规范统一以保证结果可靠性（如尿液避免污染，组织固定及时充分）。
- 对照设置： 实验必须设立同周龄、同遗传背景的健康小鼠作为正常对照。
- 半定量评分： 组织病理学（光镜、免疫荧光）和部分分子标志物结果需采用公认的半定量评分标准，并由至少两位经验丰富的观察者盲法评估以减少主观误差。
- 验证抗体特异性： 免疫组化/荧光/ELISA/WB等使用的抗体需验证其在小鼠中的特异性和有效性（查阅文献或提供验证数据）。