DMN诱导的小鼠肝纤维化模型：构建方法与综合检测项目
一、模型原理
二甲基亚硝胺（DMN）是一种肝毒性化合物，通过代谢活化产生甲基自由基，导致肝细胞损伤、炎症反应及星状细胞（HSC）活化，最终诱发肝纤维化。该模型具有病理特征典型（如胶原沉积、假小叶形成）、可重复性高的特点，是研究肝纤维化机制和药物干预的经典模型。
二、模型构建方法
实验设计
- 动物：C57BL/6或BALB/c小鼠（6-8周龄）
- 给药方案：
- DMN剂量：10 mg/kg（腹腔注射）
- 频率：每周连续3天（如周一、二、三），休息4天
- 周期：4周（中-重度纤维化）
- 对照组：等量生理盐水注射
注意：DMN需避光保存，现配现用；操作时佩戴防护装备。
三、核心检测项目（重点）
1. 组织病理学检测（金标准）
- H&E染色：
- 评估肝细胞坏死、炎症浸润、结构破坏
- 关键指标：坏死面积比例、炎性细胞计数
- Masson三色染色：
- 胶原纤维呈蓝色，定量胶原沉积面积
- 天狼星红染色（Sirius Red）：
- 偏振光显微镜下：Ⅰ型胶原（红黄色）和Ⅲ型胶原（绿色）区分
- 定量分析：ImageJ软件计算胶原面积占比（%）
2. 肝纤维化血清标志物
3. 氧化应激与炎症指标
- MDA（丙二醛）：脂质过氧化产物（肝组织匀浆）
- SOD（超氧化物歧化酶）：抗氧化能力
- TNF-α、IL-1β、IL-6：促炎因子（血清或肝组织ELISA）
4. 分子机制检测
- qRT-PCR： 靶基因：
TGF-β1、α-SMA（HSC活化标志）、Col1a1、Col3a1、TIMP-1 - Western Blot： 蛋白表达：α-SMA、Collagen I、TGF-β1/Smad通路蛋白
- 免疫组化（IHC）： 定位α-SMA⁺活化的HSC（肝组织切片）
5. 肝纤维化功能评估
- 羟脯氨酸（Hyp）含量：
- 原理：胶原特有氨基酸，含量反映总胶原沉积
- 步骤：肝组织酸水解 → 比色法测定
四、结果示例
**p<0.01 vs 对照组
五、模型优化与注意事项
- 剂量调整：根据小鼠品系调整DMN浓度（8–12 mg/kg），避免急性肝衰竭。
- 动态监测：第2、4周分批处死，观察纤维化进展。
- 替代模型：
- 四氯化碳（CCl₄）诱导：更快但变异大
- 胆管结扎（BDL）：胆汁淤积性纤维化
六、结论
DMN模型通过多维度检测项目（组织学、生化、分子、功能）可全面评估肝纤维化程度，适用于：
- 纤维化机制研究（如TGF-β/Smad通路）
- 抗纤维化药物筛选（如靶向胶原合成或HSC活化）
参考文献
- George J. et al. (2017). Nature Protocols - 标准DMN建模流程
- Iredale J.P. (2007). J Hepatol - 纤维化检测标志物评价
- Lee U.E. (2010). Am J Pathol - 氧化应激在DMN模型中的作用
注：实验需经动物伦理委员会批准（IACUC Protocol），符合"3R"原则。
如需特定检测方法的详细Protocol（如Hyp测定步骤、天狼星红定量分析代码），可进一步补充说明。