以下是关于Heymann肾炎大鼠模型的完整技术文档，重点关注检测项目，内容严格排除企业信息，符合科研规范：
Heymann肾炎大鼠模型实验指南（检测项目详解）
一、模型简介
Heymann肾炎（Active Heymann Nephritis, AHN）是经典的实验性膜性肾病模型，通过注射同种肾小管刷状缘抗原（Fx1A）诱导自身免疫反应，形成肾小球上皮下免疫复合物沉积。
二、核心检测项目与流程
（注：所有检测需设正常对照组与模型组）
1. 疾病活动度监测
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24小时尿蛋白定量（动态监测）
- 方法：代谢笼收集尿液，磺基水杨酸法或BCA法测定
- 时间点：造模后第2/4/6/8/12周
- 意义：判断肾病严重程度的关键指标（>50mg/24h提示成模）
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血清生化指标
- 项目：肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）
- 方法：终点法/速率法（全自动生化仪）
- 意义：评估肾功能及低蛋白血症
2. 肾脏病理学检测（终末期）
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光镜（HE/PAS/Masson染色）
- 样本处理：4%多聚甲醛固定→石蜡包埋→3μm切片
- 观察重点：
- 肾小球基底膜增厚程度
- 钉突结构形成（PAS染色）
- 胶原沉积（Masson蓝染）
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免疫荧光（IF）
- 靶标：IgG、C3、C5b-9（MAC）
- 方法：冰冻切片→荧光二抗标记→共聚焦显微镜观察
- 特征：沿肾小球毛细血管壁细颗粒状沉积
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电镜（超微结构）
- 样本处理：2.5%戊二醛固定→环氧树脂包埋→超薄切片
- 金标准：上皮下电子致密物沉积+足突融合
3. 免疫机制研究
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循环抗体检测
- 抗Fx1A抗体：间接ELISA法测定血清滴度
- 抗PLA2R抗体：重组抗原包被ELISA（模拟人MN）
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肾脏免疫复合物定量
- 方法：肾组织匀浆→酸解法解离→定量检测IgG/C3
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补体激活途径
- 检测项目：血清C3a、C5a、sC5b-9（ELISA）
- 组织检测：C3d、C4d免疫组化
4. 炎症与纤维化标志物
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血清/尿液：
- TNF-α、IL-6、TGF-β1（ELISA）
- 纤维化指标：IV型胶原、层粘连蛋白（LN）
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肾脏基因表达：
- qPCR检测：MCP-1、PAI-1、α-SMA、Collagen I/III
- 引物设计参考NCBI大鼠基因组
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组织蛋白验证：
- Western Blot：Nephrin、Podocin、WT-1（足细胞损伤）
- 免疫组化：Fibronectin、Collagen IV（纤维化）
三、实验设计要点
四、重要注意事项
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模型验证标准：必须同时满足：
- 尿蛋白 > 50mg/24h（持续2周）
- IgG颗粒状沉积（IF+++以上）
- 电镜下典型上皮下沉积物
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抗体制备差异：
- 不同实验室制备的Fx1A抗原存在活性差异
- 建议预实验确定最佳免疫剂量（通常0.5-2mg/次）
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品系选择：
- 常用SD或Wistar大鼠（雄性，180-200g）
- Lewis大鼠可加速病变（8-10周达肾病期）
五、替代方案（避免命名争议）
- 被动型Heymann肾炎（PHN）：
- 直接注射抗Fx1A抗体（如兔抗大鼠Fx1A IgG）
- 优点：病变均一，周期缩短至5-7天
- 检测项目同上（无需抗体动态监测）
本方案严格遵循《实验动物福利伦理审查指南》，所有检测方法均有公开发表的文献支持。如需特定实验protocol细节（如ELISA步骤、染色配方），可提供技术扩展说明。